三种方法检测乙肝病毒血清标记物的结果比较分析

黄桂苹

[摘要] 目的 比较金标快速检测板、酶联免疫法和荧光定量PCR检测乙肝五项结果的一致性,分析其产生原因及临床应用价值。方法 对我单位2004年1月～2008年1月511例疑似乙肝患者血清进行金标快速检测板、酶联免疫法和荧光定量PCR三种方法检测,比较三种方法的一致性。结果 HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)组(大三阳组)患者287例经酶联免疫法和荧光定量PCR检测全部检出,符合率100%,金标快速检测板检测出285例,符合率99.3%;HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)组(小三阳组)患者210例经酶联免疫法检出208例,符合率99.04%,荧光定量PCR检测全部检出,金标快速检测板检测出199例,符合诊断率94.76%。结论 传统酶联免疫法检测乙型肝炎病毒检出率高,结果准确,出现少见模式时易出现检测错误;荧光定量PCR检测法灵敏度高,可为临床HBV感染、复制及传染性的判断提供可靠的依据;金标快速检测板方法简单、快速,但灵敏度不如前两种方法,较适于急诊检验。

[关键词] 金标快速检测板; 酶联免疫法; 荧光定量PCR检测; 乙肝五项; HBV

[中图分类号] R512.62;R446 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2009)23-112-02

乙型肝炎是常见的传染病之一,我国是该病的高发区,人群感染率约为10%[1]。随着临床检测技术的不断发展,乙肝病毒的检测方法随之增加。我单位自2004年1月～2008年1月对511例疑似乙肝患者血清进行酶联免疫(ELISA法)法、金标快速检测板法和荧光定量PCR检测法进行比较分析,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

资料来源于2004年1月～2008年1月来我单位就诊的511例疑似乙型肝炎患者,其中男298例,女213例,年龄16～73岁。511例疑似病例首先经金标快速检测板检测,未检出HBeAb者,采用酶联免疫法补充检测,后经荧光定量PCR检测法进行检测和量化判断。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂 金标快速检测板采用艾康生物技术(杭州)有限公司产品,批号为:200405024。ELISA法检测试剂由北京玛诺生物制药有限公司生产,国药准字S19983029。深圳匹基生物工程股份有限公司生产的HBV-DNA荧光定量检测试剂盒,批号20050901。德灵BEP2000型全自动酶联免疫系统分析仪,美国应用生物系统公司Prism?誖 7000型实时荧光定量PCR仪。全部检测严格按照仪器和试剂和说明书操作。

1.2.2 检测方法 金标快速检测板采用快速免疫层析法,其中HBsAg、HBeAg采用双抗体夹心法,HBsAb采用双抗原夹心法,HBeAb、HBcAb采用竞争抑制法,按说明书要求操作并判断结果。ELISA法采用全自动酶免系统分析仪,以S/CO值判定结果。荧光定量PCR检测的定量结果采用求对数平均值的方法计算HBV-DNA的平均拷贝数。

1.3 统计学处理

采用SPSS12.0统计学软件,组间采用χ2检验,P<0.05具有显著性差异。

2 结果

以目前最灵敏的荧光定量PCR检测法为参照。511例疑似乙肝患者血清标本中,检出HBV-DNA阳性497例。大三阳合小三阳组的检出率三种方法分别为:99.3%和94.76%;100%和99.04%;100%。见表1。

3 讨论

本组研究表明,金标快速检测板、酶联免疫法和荧光定量PCR检测乙肝病毒三种方法都比较实用,对于检测HBV的感染与复制,三种方法都具有一定的HBV-DNA检出率。金标快速检测板有11例未能检出HBeAb,符合率94.76%,由于HBeAb的检测是采用竞争法,结果的判定是比较检测线和控制线颜色的深浅,而当这两条线颜色相近时,肉眼辨色困难而影响判定,因此造成金标快速检测板HBeAb的假阴性增多[2]。而对于HBcAb的检测,金标快速检测板的灵敏度和特异性稍差[3]。酶联免疫法出现少见模式时,如HBsAb(+)、HBeAb(+)及HBeAb(+)ELISA法检测为HBeAb阳性,HBcAb阴性,而荧光定量PCR检测法则HBeAb伴随HBcAb同时阳性。出现上述原因主要是由于酶联免疫法测HBcAb标本是1∶30稀释后检测,而测HBeAb则用原血清。因此出现很多HBeAb阳性而HBcAb阴性模式,而金标快速检测板和荧光定量PCR检测法均用的原血清,所以不存在此问题。另外一个原因可能是酶联免疫法采集的标本水浴处理时间短,血球沉降不充分,试管壁上有血痂,快速离心导致溶血,因血球中过氧化物酶溶出粘附于酶标板未被洗去,产生过氧化物酶样作用而显色致假阳性[4]。荧光定量PCR检测法采用了完全闭管和荧光探针,通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果,从而决定被测物质的浓度不受黄胆溶血及脂血影响,避免了交叉感染,因此其假阳性率较低[5]。此外荧光定量PCR检测法还可以准确的反应出HBV-DNA的复制水平、病程变化和治疗恢复情况[6]。

综上所述,三种方法检测乙肝病毒各具优势。金标快速检测板法灵敏、简单、快速,适合于急诊应用;传统的酶联免疫法设备简单、收费低廉、易于开展,适用于常规检查[7];而荧光定量PCR检测法非常精确,其高灵敏度可为早期诊断HBV感染提供依据,并可提供准确的HBV-DNA感染、复制和传染性等情况。建议临床根据实际情况,疑似乙肝患者采用多种方法检测乙肝病毒[8]。

[参考文献]

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(收稿日期:2009-03-04)