红细胞冰冻解冻过程中形态体积变化分析

袁连根　刘　丹　李延成

[摘要] 目的 探索红细胞在冰冻解冻过程中形态体积的动态变化情况,寻求科学的冰冻解冻程序。方法 通过测定观察红细胞在冰冻、解冻洗涤过程中的体积和形态,并运用统计学方法,研究红细胞的变化规律。结果 红细胞在冰冻解冻过程中体积由大逐渐变小直至恢复正常,形态由大刺毛细胞或大球形细胞逐渐恢复正常红细胞的圆盘状。结论 随着红细胞冰冻解冻过程的顺次进行,红细胞体积和形态逐渐恢复正常。

[关键词] 红细胞冰冻; 红细胞解冻; 细胞体积; 洗涤

[中图分类号] R197.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2009)23-113-02

红细胞的冰冻保存解决了特殊血型血液和自体血液长期储存的问题,加入细胞内冰冻保护剂甘油后,红细胞在-80℃条件下可保存10年,临床使用前要做复苏、洗涤去除冰冻保护剂的处理[1]。本研究着重于观察分析红细胞冰冻解冻过程中各步骤细胞形态体积的动态变化情况,为红细胞解冻过程中关键控制点的操作提供事实依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源

衡水市中心血站Rh阴性红细胞冰冻保存、Rh阴性冰冻红细胞解冻后供应临床各20例。

1.2 工艺流程

1.2.1 红细胞的冰冻 加入57.1%的甘油,使甘油在红细胞中的浓度达40%,于-80℃冰箱冰冻保存。

1.2.2 一洗(第一遍洗涤红细胞) 于38～40℃水浴解冻红细胞,然后依次加入浓盐水、羟乙基淀粉,离心弃去上清液。

1.2.3 二洗(第二遍洗涤红细胞) 依次加入羟乙基淀粉、生理盐水洗涤,离心弃去上清液。

1.2.4 三洗(第三遍洗涤红细胞)加入生理盐水洗涤,离心弃去上清液。

1.2.5 四洗(第四遍洗涤红细胞) 加入生理盐水洗涤,离心弃去上清液。

1.2.6 悬浮 红细胞用生理盐水悬浮后供应临床。

1.3 方法

在工艺过程中红细胞冰冻前、各洗涤过程离心弃去上清液前、生理盐水悬浮后分别取样,用显微镜和血细胞计数仪观察检测红细胞形态体积的动态变化,各样本相互对照研究并与正常红细胞对照研究。

2 结果

流程各阶段取样,与正常人红细胞体积(90fL)[2]作对比分析,结果见表1。将各阶段红细胞体积相互对比观察,分析细胞大小变化的显著性差异,结果见表2,3。

3 讨论

红细胞的冰冻、解冻过程是一个比较复杂的过程,涉及细胞微细结构的变化、功能的恢复等。通过与正常红细胞对照分析,红细胞在加入冰冻保护剂和解冻洗脱甘油过程一洗——三洗后的红细胞体积都大于正常,四洗和悬浮后的红细胞体积恢复正常。通过显微镜观察,红细胞的形态由加入甘油后的大刺毛细胞或大球形细胞逐渐恢复至圆盘状。形态大小的恢复是决定其输入人体后发挥正常生理功能的基础。

红细胞在加入甘油后体积与解冻第一次洗涤后的体积无明显变化,显微镜下,其形态也无明显变化。在这个过程中,红细胞内的渗透压变化很大,但形态体积基本无变化,说明红细胞在加入甘油后已处于高度膨胀状态,所以在甘油的加入过程和解冻时第一次洗涤过程,液体的加入速度一定要慢,并有足够的平衡时间,促进细胞内外渗透压的平衡,避免造成红细胞的破裂。一洗——四洗过程中相互之间细胞体积的变化比较显著,在此过程中红细胞体积由大逐渐变小,四洗和悬浮后红细胞之间,体积无明显差异,说明四洗后红细胞体积已恢复正常。

[参考文献]

[1] 王培华. 输血技术学[M]. 北京:人民卫生出版社,1998:68-70.

[2] 全国卫生专业资格考试专家委员会. 2008年全国卫生资格考试指导——临床医学检验与技术(中级)[M]. 北京:人民卫生出版社,2008:20.

(收稿日期:2009-03-14)