气相色谱法同时测定活络酊中樟脑、薄荷脑的含量

王天亮， 诸葛俊

(浙江天一堂药业有限公司浙江金华321100)

活络酊由生川乌、防己、延胡索、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯、冰片等十二味组成，具有舒筋祛寒，活血止痛功效，用于筋骨痛，急性扭伤，肌肉疼痛及风湿痛，肝区疼痛等症。原标准［1］只对其进行了定性鉴别，未制订含量测定项目。现对活络酊中樟脑、薄荷脑的含量测定进行研究，参照文献［2-7］建立了气相色谱仪测定樟脑、薄荷脑含量的方法，为该制剂的质量控制提供参考。具体方法学内容如下:

1 仪器与试药

HP6890气相色谱仪。樟脑、薄荷脑对照品，由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用，批号分别为:747-20005、0728-9304)。正十四烷，由Fluck公司提供。活络酊由本公司制备(批号为:20081203、20081204、20081205、20081206)。试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性

色谱条件:聚合/交联聚乙二醇毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，氢火焰检测器。程序升温:初始90℃，每分钟7℃升至200℃，保持5 min;载气流速:1.5 mL/min;分流进样，分流比:5∶1;以正十四烷为内标。在此色谱条件下樟脑、薄荷脑与相邻色谱峰均能基线分离，同时样品溶液与阴性对照液相比，阴性对照溶液无干扰，结果见图1～6。

图1 正十四烷色谱图

图2 樟脑对照品色谱图

图3 薄荷脑对照品色谱图

图4 活络酊供试品色谱图(加内标)

图5 缺樟脑阴性样品色谱图

图6 缺薄荷脑阴性样品色谱图

2.2 内标溶液、对照品溶液与供试品溶液制备

内标溶液的制备 取正十四烷适量，精密称定，加无水乙醇溶解并稀释成每1 mL含4 mg的溶液，即得。

对照品溶液的制备 取樟脑、薄荷脑对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1 mL分别含2.9 mg、2.2 mg的混合溶液，即得。

供试品溶液制备 精密量取样品1 mL，置25 mL量瓶中，精密加入内标溶液2 mL，摇匀，即得。

2.3 线性关系考察

分别精密量取樟脑、薄荷脑混合对照品溶液1、2、5、7、10 mL置25 mL量瓶中，各精密加入正十四烷内标溶液2 mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。分别取2 μL注入气相色谱仪，以对照品与内标浓度的比值为横坐标，对照品与内标峰面积的比值为纵坐标，得樟脑对照品线性回归方程:Y=0.822 9X，r=1.000 0，薄荷脑对照品线性回归方程:Y=0.862 5X+0.000 2，r=1.000 0，显示樟脑进样量在207～2 066 ng范围内，薄荷脑进样量在149～1 486 ng范围内，有良好的线性关系。

2.4 精密度试验

取供试品溶液，按2.1项所述色谱条件，重复进样6次，测定樟脑、薄荷脑的峰面积，计算樟脑、薄荷脑内标峰面积的比值，结果RSD均为0.1%(n=6)，见表1。

2.5 稳定性试验

取供试品与对照品溶液，按2.1项所述色谱条件，间隔一定时间进样一针，测定樟脑、薄荷脑的峰面积，计算樟脑、薄荷脑与内标峰面积的比值，显示对照品溶液与供试品溶液稳定，结果见表2。

2.6 重复性试验

分别精密量取同一批号样品(20081203)6份，制成供试品溶液，测定峰面积并计算樟脑、薄荷脑含量，结果樟脑的平均含量为14.28 mg/mL，RSD=0.3%(n=6);薄荷脑的平均含量为 11.02 mg/mL，RSD=0.5%(n=6)，见表 3。

表1 樟脑、薄荷脑精密度试验结果

表2 樟脑、薄荷脑稳定性试验结果

表3 樟脑、薄荷脑重复性试验结果

2.7 回收率试验

精密量取已知含量样品(20081203)6份，精密加入樟脑、薄荷脑对照品适量，制成供试品溶液，测得峰面积并计算含量，结果显示樟脑平均回收率为102.1%，RSD=0.7%(n=6)，薄荷脑平均回收率为103.0%，RSD=0.6%(n=6)见表 4、5。

表4 樟脑回收率试验结果

表5 薄荷脑回收率试验结果

2.8 样品测定与限度制定

测定样品3批，结果见表6，根据测定结果折算出每1 mL的含量(见表6)，限度暂订为每1 mL含樟脑(C10H16O)不得少于11.2 mg，薄荷脑(C10H20O)不得少于8.4 mg。

表6 樟脑、薄荷脑样品测定结果(n=2)