复方银杏叶口服液的质量控制方法研究

张建华 周金彩*

银杏叶制剂用于脑部、周围血管血液循环障碍疾病及器质性痴呆等症的治疗[1]。复方银杏叶口服液是我们开发的医院制剂，由银杏叶标准提取物和人参浸膏、五味子提取物等组成，主要含有银杏总黄酮醇苷和萜类内酯，人参总皂苷、五味子素等活性成分。我们参照有关文献[2,3]，通过高效液相色谱法测定银杏总黄酮醇苷含量，建立复方银杏叶口服液的质量控制方法。

1 仪器与试药

Waters Alliance高效液相色谱仪（美国 Waters公司）；对照品：槲皮素（Q）（批号：100081-200406）、山柰素（K）（批号：110861-200606）、异鼠李素（I）（批号 ：110860-200407）（由中国药品生物制品检定所提供）；供试品：复方银杏叶口服液（自制，批号20080311，含总黄酮醇苷不得少于2.8%）；甲醇为色谱纯；试剂均为分析纯；水为注射用水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

图1 黄酮醇苷高效液相色谱

填充剂：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱（4.6 mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇-0.4%磷酸（50∶50） ；检测波长：360nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量10μL。理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于2500。

2.2 对照品溶液的配制

分别精密称取Q、K、I对照品适量，加甲醇溶解配制成每1mL分别含30、30、20μg的混合溶液，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取滤液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的配制

精密吸取供试品2.5mL（相当于总黄酮醇苷9.0mg），加甲醇-25%盐酸溶液（4∶1）的混合溶液25mL，置水浴中加热回流30min，放冷，转移并定容50mL量瓶中，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取滤液，作为供试品溶液。

2.4 银杏总黄酮醇苷测定法

分别精密吸取取银杏总黄酮醇苷对照品溶液与供试品溶液各10μL，按上述色谱条件进样，记录色谱图，对照品、供试品色谱图，见图1。由图1可见，Q、K、I色谱峰分离良好（R＞1.5）。

2.5 线性关系

精密吸取对照品溶液2、4、8、12、16、20μL，按上述色谱条件分别进样测定峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标、进样量（X）（μg）为横坐标绘制标准曲线，对照品3组分的回归方程和相关系数，结果见表1。

表1 对照品的回归方程和相关系数

2.6 精密度、稳定性及重复性试验

精密吸取对照品溶液10μL，依上述色谱条件进样测试，重复5次，测得Q、K、I峰面积RSD分别为1.54%、1.85%、1.63%。

取同一份供试品溶液依次在0、2、4、8、12、24、48 h 测定测得Q、K、I峰面积RSD分别为1.13%、1.28%、1.03%，表明供试品溶液在室温下48h内稳定。

取同一批复方银杏叶口服液，按供试品制备方法平行制备6份，测得Q、K、I峰面积RSD分别为1.24%、1.15%、1.09%，表明该方法的重复性符合含量测定要求。

2.7 加样回收率试验

分别精密吸取已知含量的供试品0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80mL，各精密加入对照品溶液20mL，按“2.3”项下方法配制，摇匀。依上述色谱条件测试，精密吸取10μL进样，计算含量，结果见表2。

2.8 供试品含量测定[2,4]

精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，按上述色谱条件进样测定，外标法计算含量，分别计算Q、K、I的含量，银杏总黄酮醇苷含量=（Q含量+K含量+I含量）×2.51，供试品1mL含银杏总黄酮醇苷不得少于3.6mg。

3 讨 论

复方银杏叶口服液主要含有银杏总黄酮醇苷、萜类内酯、人参总皂苷等活性成分，供试品经盐酸水解法前处理，采用高效液相色谱法测定银杏总黄酮醇苷，外标法计算含量，Q、K、I色谱峰分离良好（R＞1.5），供试品其他组分对Q、K、I均无干扰。本方法重现性好，敏感度高。因此，通过测定银杏总黄酮醇苷含量可以作为复方银杏叶口服液的经验性质量控制方法。

表2 回收率试验结果

[1]Allard M. Treatment of old age disorders with Ginkgo biloba extrat[M]//. In: Funfgeld EW,ed. Recent results in pharmacology and clinic. Berlin: Springer –Verlay,1988:201-211 .

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[M].北京:北京工业出版社,2005:281-282.

[3]张蕾,陈骁鹏,董小平.高效液相色谱法测定银杏叶胶囊含量[J].江苏药学与临床研究杂志,2004,12(1):29-32.

[4]俞曼雷,谢德隆,胡馨,等.高效液相色谱法测定银杏叶制剂中黄酮苷含量[J].中药新药与临床药理,1998,9(1):45-47.