标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量测定*

吉坤美,刘晓宇,唐 艳,詹政科,刘志刚

2.深圳大学生命科学学院,深圳 518060;

3.深圳市人民医院龙华分院,深圳 518109

标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量测定*

吉坤美1,刘晓宇2,唐 艳3,詹政科1,刘志刚1

目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Derf 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f 2重组蛋白并通过亲和层析纯化,再免疫小鼠,利用间接ELISA筛选获得McAb杂交瘤细胞株并纯化、鉴定抗体的特异性;用一株单抗包被酶标板,同时用生物素标记另一株单抗,从而建立双单抗体夹心ELISA法;并用此法测定粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。结果成功地获得了一株单抗3B12与屋尘螨抗原具有交叉反应,另外一株单抗3G7与屋尘螨抗原没有交叉反应,并建立了双单抗夹心ELISA方法测定Der f 2的含量,其方法的检测限为0.5ng/mL,并在6.25ng/mL-300ng/mL范围内线性良好;标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量为100ng/10000BAU。结论成功制备了高效价抗Der f 2单抗,并建立了双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有很高的灵敏度,可以测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量,为临床应用奠定基础。

尘螨过敏原;Der f 2;单克隆抗体;夹心ELISA

2.深圳大学生命科学学院,深圳 518060;

3.深圳市人民医院龙华分院,深圳 518109

尘螨是世界性分布的重要变应原,室内主要分布在卧具、沙发、地面以及空调滤网等处。引发人类过敏反应的主要尘螨种类有屋尘螨(DermatophagoidesPteronyssinus,Der p)和粉尘螨(DermatophagoidesFarinae,Der f);其分泌物、排泄物及其尸体的降解物等以尘埃颗粒飞扬于空气中,过敏体质者吸入后,可诱发Ⅰ型变态反应,从而引起哮喘、过敏性鼻炎、异位性皮炎和荨麻疹等多种变态反应性疾病(又称过敏性疾病)〔1-3〕。……