HPLC法测定木豆叶中牡荆苷的含量

2010-10-29 06:37
首都食品与医药 2010年2期
关键词:牡荆供试甲醇

广州市药品检验所三分所(510700)肖佳尚

木豆叶为豆科植物木豆Cajanus cajan(L.)Millsp.的干燥叶,具有清热解毒、消肿止痛功效,用于小儿水痘、痈肿疮疖[1]。木豆叶主要含以牡荆苷为主的黄酮类等有效成分[2]。本试验采用HPLC法测定木豆叶中牡荆苷的含量,以控制其药材的质量,现将结果报道如下:

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(HP1050),紫外检测器;甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯;牡荆苷对照品(购自Zigma公司,经面积归一化法处理含量为92.6%);木豆叶药材购自广州致信药业中药饮片厂。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Nucleodur C18Gravity(250mm×4.6mm,5μm);流动相采用梯度洗脱:0min时甲醇-1%冰醋酸(30:70);20min时甲醇-1%冰醋酸(40:60);流速:1ml/min;检测波长:339nm;在上述条件下牡荆苷与其他成分分离度良好。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取牡荆苷对照品2.92mg,置100ml量瓶中,用50%甲醇溶解并稀释至刻度。

2.3 线性关系考察 精密吸取上述对照品溶液4、8、12、16、20μl注入高效液相色谱仪中,按上述色谱条件测定,测定结果以进样量(μg)为横坐标,以色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为:Y=2404.628X-44.552,r=0.9999,线性范围为0.108~0.541μg。

2.4 供试品溶液的制备 取本品粉末2.5g,精密称定,精密加入50%甲醇25ml,超声处理30 min,用50%甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得。

2.5 精密度试验精密吸取对照品溶液10μl,重复进样5次,峰面积积分值的RSD为0.52%。

2.6 稳定性试验 对同一供试品溶液每隔2h测定一次,结果牡荆苷在12h内较稳定。

2.7 重复性试验 取同批样品5份,按含量测定项平行试验,测得样品中牡荆苷的含量平均为0.315mg/g,RSD为2.74%。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品约1.25g,精密加入牡荆苷对照品溶液(0.0792mg/ml)5ml,按供试品溶液的制备及样品测定项操作,结果见附表1。

2.9 样品测定 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,分别注入液相色谱仪中,测定峰面积,按外标法计算含量,结果见附表2。

附表1 加样回收率试验结果

附表2 样品含量测定结果(mg/g,n=2)

3 讨论

牡荆苷的50%甲醇液经紫外扫描在268nm和339nm波长处有最大吸收,339nm波长的响应值大于268nm,故选择339nm作为检测波长。试验用甲醇和50%甲醇超声提取效果好。经超声处理20、30、40、50min试验,结果超声30min即可提取完全,提取时间选择30min。经试验,采用本文的梯度洗脱可将牡荆苷与其他黄酮类成分较好地分离。

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