库尔勒香梨mRNA差异显示技术体系的建立

张飞,牛建新,叶春秀,刘娜,高静涛,朱天丁

(石河子大学农学院园艺系,石河子832003)

库尔勒香梨mRNA差异显示技术体系的建立

张飞,牛建新,叶春秀,刘娜,高静涛,朱天丁

(石河子大学农学院园艺系,石河子832003)

为了研究库尔勒香梨萼片脱落与宿存的本质,试验以库尔勒香梨盛花前期的同一时间同一棵树同一花序的第2位序花和第4序位花为试验材料,采用mRNA差异显示的方法进行研究。扩增体系为20μL:cDNA 2.0μL,10μmol/L 锚定引物2.0μL,10μmol/L 随机引物2.0μL,2.5 mmol/L dNTPs 2.0μL,5 U/μL Taq 0.25μL,10×PCR buffer 2.5μL,ddH2O 9.25μL。结果显示,扩增产物经6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,获得了比较清晰的差异条带,回收并克隆差异条带,分离得到一些差异表达的片段,优化了库尔勒香梨mRNA差异显示技术,为克隆差异表达基因的全长cDNA奠定了良好基础。

库尔勒香梨;萼片;体系;mRNA差异显示

mRNA差异显示(differential display reverse transcription-PCR,DDRT-PCR)技术是根据高等生物成熟的mRNA都带有polyA的特性,用特定的锚定引物反转录后,进行 PCR扩增,建立起来的可将不同细胞系、不同组织间,或同一细胞系、同一组织不同条件下差异表达基因分离和克隆的PCR技术[1]。现已被广泛的用于植物的各类激素诱导的特异基因[2-4]、胁迫诱导的特异基因[5-10]、杂种优势机理[11-13]和植物个体发育的分子机制[14-16]等方面的研究。

库尔勒香梨(Pyrus brestschneideri Rehd),属新疆梨种,是一个古老的地方优良品种,其果实大小适中,皮薄肉脆,细嫩多汁,维生素C含量丰富且耐贮藏,尤以芳香味最为独特。已出口至美国、澳大利亚、欧盟等十多个国家和地区。但是,由于受到遗传特性的影响,同一棵树上同一花序不同序位的花萼片脱落比率有较大差异,而宿萼果对库尔勒香梨的商品品质影响较大[17-18]。……