人DNMT3B1原核表达载体的构建和表达*

姜树原 张颜波 邹 绮 罗天娇 张 胜 周立社 邵 国，3

(1.包头医学院生物医学研究中心 ，内蒙古 包头 014010；2. 泰山医学院附属医院神经内科, 山东 泰安 27100；3.汕头大学医学院分析细胞学实验室，广东 汕头 515041)

细菌到植物和动物，体内DNA都存在甲基化修饰的现象。在高等脊椎动物中，基因组中5%的胞嘧啶(C)可发生甲基化，发生甲基化的位置常位于基因组中CpG岛中的胞嘧啶(C)的第五位碳上,大约有70% 的CpG岛被甲基化[1]，CpG岛中C的甲基化是一些生理及病理现象的原因，即CpG岛正常的甲基化控制着基因特异表达、发育调节、基因组印记和X染色体失活，而CpG岛异常的甲基化是诱导突变，产生癌症等疾病的罪魁祸首[2]。DNA的甲基化主要通过DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases, DNMTs) 来完成[3]，目前哺乳动物中的DNMTs主要由DNMT1，DNMT2，DNMT3A，DNMT3B，DNMT 3L组成。DNMT1是持续性甲基化酶，其底物是半甲基化的DNA[4]。DNMT2的功能尚不明朗，有报道称它不甲基化DNA而是甲基化天冬氨酸tRNA。DNMT3A和DNMT3B有从头催化DNA甲基化的能力[1]。DNMT3L单独没有催化能力，但它可以和DNMT3A和DNMT3B相互作用，调节其活性[5]。

从Li en 研究团队克隆到DNMT3B基因的同时，他们就发现有DNMT3B异构体的存在。DNMT3B到目前为止发现了40余种异构体，这些异构体的生物学功能还不完全明确，甚至存在争议[6，7]。因此利用纯生物化学的方法，用原核表达某种异构体，对在体外研究其功能是十分必要而且有重要意义的。本研究我们利用大肠杆菌作为生物反应器，表达DNMT3B1，为体外研究该异构体奠定坚实的基础。

1 材料与方法

1.1 主要材料和试剂

HCT116细胞购于上海细胞所； Trizol购自GIBCOBRL公司；反转录试剂盒购于invitrogen公司；……