一氧化碳中毒迟发记忆障碍小鼠血小板膜糖蛋白CD 61的研究

彭道勇 王苏平 李迪 朱晓钰

(大连市中心医院神经内科 辽宁大连 116000)

一氧化碳中毒迟发记忆障碍小鼠血小板膜糖蛋白CD 61的研究

彭道勇 王苏平 李迪 朱晓钰

(大连市中心医院神经内科 辽宁大连 116000)

目的 通过对一氧化碳中毒迟发记忆障碍小鼠血小板膜糖蛋白CD61的研究,探索一氧化碳中毒迟发脑病的发病机制。方法筛选出急性中毒迟发记忆障碍小鼠,测其血CD61表达情况。结果 急性一氧化碳中毒小鼠中有10%出现迟发记忆障碍,其血CD61的表达量明显高于对照组。结论 血小板活化和血栓形成可能是迟发脑病的发病机制之一。

氧化碳中毒 迟发记忆障碍 CD61

一氧化碳(Carbon monoxide,CO)是造成中毒性死亡最常见的窒息性气体,部分患者经过数日或数周的假愈期后,还会发生迟发性脑病(Delayed neuropsychologic sequelae,DNS),临床表现为一组以急性痴呆为主的精神神经功能紊乱,其发病机制不清。本研究检测CO中毒迟发记忆障碍的小鼠血CD61的表达。

1 材料与方法

1.1 材料及试剂

选用健康昆明小鼠80只,体重18～20g,鼠龄2～3个月,每笼5只温室饲养。99.9%CO气;PE标记的小鼠CD61抗体及同型对照,流式细胞仪

实验动物分组及模型制备：(1)将小鼠饲养1周以适应环境后行光电刺激小鼠条件反射跳台适应性训练,让小鼠学会跳上安全台。(2)染毒。采用按体重(1.5m L/10g)每间隔6h连续8次注射99.9%的CO气体致小鼠中毒进行染毒。

1.2 迟发记忆障碍小鼠的筛选

于小鼠中毒后第1、3、5、7、11、15、20、25、30天,分别利用光电刺激小鼠条件反射跳台仪记录小鼠跳下安全台的跳台潜伏期,作为评价小鼠的记忆保持巩固能力的指标。筛选出迟发记忆障碍小鼠。

1.3 标本制备

从小鼠眶动脉和眶静脉采血0.5m L(3.8%枸橼酸钠1∶9抗凝),按步骤制备标本:100uL全血+10uL对照试剂,100uL全血+10uL实验试剂避光孵育15m in,自动定容到1m L,上机待测。

1.4 小鼠血血小板CD61测定

用流式细胞仪检测标本,每管收集10000个CD61阳性血小板,记录CD61的强度。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 CO中毒小鼠记忆保持能力的改变

小鼠腹腔注射CO中毒后第1天记忆保持能力明显受损,第3天基本恢复正常,在第5、7、11天的测试中各有2只、第15、20天各有1只小鼠再次出现记忆保持能力受损。将再次出现记忆保持能力受损的8只小鼠(标记为A组);在未再次出现记忆保持能力受损的观察组中随机抽取8只小鼠(标记为B组)。

表1 2组小鼠记忆保持能力、COHb、血CD 61表达(±s)

表1 2组小鼠记忆保持能力、COHb、血CD 61表达(±s)

注:与B组相比较(1)P<0.05;(2)P<0.01

与B组相比较,A组小鼠记忆保持能力明显受损(P<0.01); COHb无明显变化。

2.2 流式细胞仪测小鼠血CD61结果

与B组相比较,A组血CD61增加(P<0.05),见表1。

3 讨论

关于CO中毒及其迟发性脑病发病机制的研究,缺血缺氧机制曾被许多学者所推崇[1]。但单纯的缺血缺氧机制无法解释一些现象,特别是神经、精神方面的许多症状都是在COHb水平完全恢复正常之后才出现,近年来关于缺血性脑卒中后白细胞浸润所致的炎症反应在缺血性脑损伤的发生、发展中所起的重要作用已被研究所证实[2]。本实验通过建立动物模型,对CO中毒后迟发记忆碍小鼠血CD61的表达进行了研究。

外周血CD61即GPⅡb/Ⅲa的复合物,是细胞黏附分子家族中的整合素分子,广泛参与细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的黏附和引发细胞内的代谢变化,并在血栓形成和炎症反应中起重要作用。正常人的血小板基本处于静息状态,而在血栓前状态、血栓性疾病过程中,受各种因素的影响,激活而成为活化血小板。一旦不可逆的活化发生,血小板和纤维蛋白原聚集成团,将引起动脉血栓形成,造成血管闭塞。CD61可与CD41形成复合体,是多种因素血小板聚集、血栓形成的最终通道[3],可直接反映血小板的活化状态。

本实验观察到CO中毒后迟发记忆障碍小鼠外周血CD61表达显著增高,说明CO中毒后,血小板活化及血栓形成,可能是出现CO中毒迟发脑病的病理原因之一。提示高压氧处理配合改善脑循环、降低纤维蛋白原及抗血小板聚集治疗有可能对CO中毒迟发脑病产生更好的疗效。

[1]Kwon OY,Chung SP,Ha YR.Delayed postanoxic encephalopathy after carbon m onoxide poisoning[J].Emerg M ed J,2004,21(2): 250～251.

[2]张海英,刘郁,赵敏.一氧化碳中毒大鼠脑内肿瘤坏死因子、白介素-10的时程变化[J].中华急诊医学杂志,2002,11(4): 227～228.

[3]李玉峰,王士雯,周荣斌,等.缺血性心力衰竭患者功能状态的研究[J].中国循环杂志,2001,16:259.

R595.1

A

1674-0742(2011)05(a)-0020-01

2010-11-22