HPLC法测定己氯软膏中氯霉素的含量

侯大平，曲秀梅，方 芳，李 冬，张志国

佳木斯大学第一附属医院药剂科，黑龙江佳木斯154002

己氯软膏是经过我院药剂科和妇科几代专家和教授摸索、循证研制的制剂。其既具有增强阴道局部抵抗力的作用，又能有效杀灭致病菌，治愈率及总有效率较高，深受广大老年妇女欢迎，此制剂亦为我院特色制剂之一。为保证药品质量和制剂标准提高需要，本文建立了HPLC法测定己氯软膏中氯霉素的含量测定方法，该法操作简便、灵敏度高，结果满意。

1 仪器与试剂

大连伊利特P230Ⅱ高效液相色谱仪，UV230Ⅱ紫外-可见检测器，EC2006色谱数据处理工作站。

甲醇（色谱纯，天津凯通化学试剂有限公司生产）；氯霉素对照品（批号：130555-200602，中国药品生物制品检定所提供）；己氯软膏（本院制剂室生产）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Sinochrom ODS2 色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相：甲醇-水（59∶41）；流速：1.0 ml/min；检测波长：272 nm；进样量：20 μl。

2.2 试验溶液的制备

精密称取本品约2 g，置100 ml碘瓶中，用甲醇超声提取 2 次（20、15 ml），每次 20 min，冷至室温，转移至 50 ml量瓶中；用少量甲醇洗涤残渣及碘瓶2次，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取4 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为样品溶液。按照处方比例及制备工艺，制备不含氯霉素的阴性样品，同法制备不含氯霉素的空白溶液。精密称取氯霉素对照品102.5 mg，置50 ml容量瓶用中，加甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，作为对照品贮备溶液。精密量取贮备溶液1 ml，置25 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度（含氯霉素0.082 mg/ml），作为对照品溶液。

2.3 专属性试验

分别取对照品溶液、样品溶液和空白溶液按色谱条件进样，色谱图见图1。

2.4 线性关系试验

分别取对照品贮备溶液 0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3 ml，分别置25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，分别进样20 μl测定，以峰面积（Y）对进样浓度（X）进行线性回归，得方程为：Y=13.954X+125.98，r=0.9957，氯霉素浓度在 57.4～106.6μg/ml范围内与峰面积成良好线性关系。

2.5 精密度实验

分别取浓度为82 μg/ml对照品溶液，连续进样7次，记录面积，RSD为1.58%，仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取0906144批号样品(含量100.29%)按“2.1”项下制备提取并进样7次，记录峰面积，RSD为1.68%，表明本方法重现性良好。

2.7 回收率试验

按处方分别精密取己烯雌酚、氯霉素和辅料，按工艺规程配制样品软膏（含氯霉素49.84 mg/g），按样品溶液制备方法分别制备样品溶液7份，按测定方法测定含量，检测结果见表1。

表1 回收率检测结果（±s，n=3）

表1 回收率检测结果（±s，n=3）

加入量（mg/ml） 测得量（mg/ml）0.082 8±0.007 6 0.080 1±0.005 7 0.079 4±0.000 9 0.079 2±0.005 7 0.078 8±0.003 1 0.078 4±0.001 3 0.081 5±0.002 8平均回收率（%）RSD（%）0.081 2 0.079 1 0.080 1 0.079 2 0.080 3 0.079 6 0.079 8回收率（%）101.89 101.24 99.24 100.05 98.16 98.54 102.11 100.181.48

2.8 稳定性试验

样品溶液配制完成后， 分别在 1、3、5、7、22、28 h 进样，记录峰面积，RSD为0.97%，结果表明样品28 h内稳定。

2.9 样品检测

按处方和工艺流程配制样品软膏15批次，按样品溶液制备方法分别制备样品溶液，按测定方法测定含量，检测结果见表2。

表2 样品检测结果

由表2可见，最高含量为108.13%，最低含量为92.57%。

3 讨论

笔者曾力图按文献[1-2]报道的方法同时测定氯霉素和己烯雌酚含量，不仅分离效果不佳，而且含量太低致使己烯雌酚峰高太小，噪声较大，无法进行测定。对于氯霉素的检测波长，文献报道的有 241[1-3]、240[4]、280[5]、和 272[6]nm，本文作者配制含氯霉素0.082 mg/ml的甲醇溶液，在220～300 nm波长进行紫外扫描，结果在272 nm处有最大吸收，与文献[6]和2005年版《中国药典》二部氯霉素含量测定项下的检测波长一致。造成差异的原因可能是与其他作者需要同时检测两种成分含量有关。在进行流动相选择时，经过筛选，以方焱等试验使用的甲醇-水（59∶41）较好，因而选择了此流动相。

由样品检测结果可见，本实验氯霉素最高含量108.13%，最低含量92.57%，鉴于制剂实际情况和检测方法刚开始使用，因此，确定软膏中含氯霉素（C11H12Cl2N2O5）应为标示含量的90%～110%。

[1]郭社民.HPLC法测定氯霉素己烯雌酚乳膏中两主组分含量 [J].中国药事,2007,21(3)：181.

[2]程洪兵.高效液相色谱法测定复方己烯雌酚乳膏中己烯雌酚和氯霉素的含量[J].中国药业,2007,16(3)：16.

[3]方焱,张善堂,陈象青,等.氯霉素氢化可的松乳膏的制备及质量控制[J].中国药房,2007,18(16)：1245.

[4]王吉华,丁华,张迪.高效液相色谱法测定复方醋酸曲安奈德滴耳液的含量[J].中国医药导报,2009,6(21)：48-49.

[5]来小丹,刘松青,林彩,等.HPLC法同时测定头皮搽剂中氯霉素和盐酸达克罗宁的含量[J].解放军药学学报,2009,25(1)：71-72.

[6]张囡,王冬.HPLC法测定复方氯霉素乳膏中氯霉素含量[J].天津药学,2010,22(2)：14-15.