PCR技术的发展及其在烟草中的应用

李 林，陈 武，周清明，黎定军

(1 湖南农业大学农学院，长沙 410128；2 湖南农业大学生物安全科技学院，长沙 410128；3 湖南广播电视大学，长沙 410004)

PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应， 是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。现已被广泛应用于农学、植物病理学等领域的研究。最初的PCR技术相当不成熟，但在随后的几十年里，PCR技术被不断改进，它从一种定性的分析方法发展到定量测定；从原先只能扩增几个 kb的基因到目前已能扩增长达几十个 kb的DNA片段[1]。到目前为止，PCR技术已有十几种之多，本文对其近年来的主要扩展及应用进行综述。

1 PCR技术的扩展

1.1 AP-PCR技术

1.1.1 AP-PCR技术的定义、来源及特点

AP-PCR(Arbitrarily primed PCR)技术[2]，是指在对所扩增基因顺序一无所知的情况下，主观上随意地设计或选择一个非特异引物进行PCR扩增，反应在不严格条件下扩增1至数轮后，再于严格条件下进行。通过比较扩增产物的指纹图，即可反映出待分析基因组的特征。AP-PCR 技术由 Williams等[3]于20世纪90年代建立，它可以快速地从两个或更多的个体组织细胞中分离出差异基因或基因差异表达产物，具有简单、灵敏、有效和重复性好等特点。

1.1.2 AP-PCR技术的应用

AP-PCR技术是常规PCR技术在差异基因分离方面的扩展，主要应用在：(1)差异基因的分离，Liang和Pardee[2]应用AP-PCR技术对正常A31和肿瘤起源的BPA31细胞进行了鉴定，并分离得到了仅存在于正常细胞的N1及仅存在于肿瘤细胞的T1片段；(2)菌株鉴定，杨国玲等[3]采用AP-PCR技术对甲真菌病病原菌进行了快速鉴定；……