表没食子儿茶素没食子酸酯对亚硫酸盐诱导的心肌细胞氧化损伤的抑制作用

赵良渊，张秋华

(1.山西医科大学药学院，山西太原 030001;2.山西大学环境与资源学院 030006)

绿茶常被称为是天然的抗氧化剂，含有很多种酚类物质，其中以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)含量最高且生物活性最强。流行病学调查和实验室研究表明，EGCG具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗肿瘤等功效［1-2］，如在日本等饮茶较多的国家或地区，冠心病等心血管疾病的发病率是非常低的［3］。近年来，关于EGCG 的抗氧化机制被广泛接受的是具有较强的抗氧化能力［4］。关于EGCG对心血管系统的保护机制报道不多，本实验主要研究了EGCG对亚硫酸盐诱导心肌细胞氧化损伤的抑制作用。

1 材料与方法

1.1动物实验动物Wistar大鼠，200～300 g，♀♂不限，由山西省中医药研究院动物房提供。

1.2大鼠心肌细胞的分离Wistar大鼠，体质量200～300 g，♀♂不限，具体分离方法见参照Wei等［5］。所有实验应在细胞分离后的12 h内完成。

1.3试剂亚硫酸钠(Na2SO3)，亚硫酸氢钠(NaHSO3)，牛磺酸(Tau)，L-谷氨酸(L-Glu)，牛血清蛋白(BSA)，HEPES，MgATP，CsCl，EGTA，EGCG 购 自 Sigma 公 司 (纯 度 ＞99.8%)，胶原酶P(Collagenase P)购自Roche公司，其它试剂均为国产分析纯。配制2 mol·L-1的NaHSO3和Na2SO3混合液(二者摩尔比为1∶3)、2 g·L-1EGCG的母液，实验前稀释到需要浓度。

1.4SOD、CAT、GPx活性的测定消化结束后，取分离完成的细胞悬液2 ml，先用10 μmol·L-1的亚硫酸盐染毒30 min，后分别加入 10、30、50 mg·L-1EGCG 处理 40 min。染毒结束后用超声波细胞破碎仪破碎细胞，于4℃ 4 000 r·min-1离心15 min。取上清液，测定总SOD，CAT，GPx的活性(按试剂盒说明书操作)。实验同时设对照和亚硫酸盐单独染毒各一组。

1.5·含量的测定同样取细胞破碎上清液，按照南京建成试剂盒测定H2O2，OH·及含量。

1.6 数据分析所有试验结果用±s表示，用one-way ANOVA检验进行统计分析。……