一株玉米弯孢叶斑病菌生长缓慢型突变株获得及T-DNA右翼序列分析

刘铜，薛文波，侯巨梅，左豫虎

（黑龙江八一农垦大学农学院，大庆163319）

由新月弯孢（Curvularia lunata）引起的玉米弯孢叶斑病是我国玉米上发生普遍的重要叶部病害[1-4]。尽管近年来随着针对该病原菌的具有热带和亚热带血缘的抗性品种的选育和推广应用，该病害的危害程度明显降低，然而人们研究发现该病原菌致病性变异或生理分化现象非常明显[5-8]，具有潜在大发生的可能，因此深入研究该病原菌的致病和生长发育的调控分子机制，对于创建持久的防控措施，稳定国家玉米生产安全具有重要意义。

目前对该菌致病机理的研究主要集中在细胞壁降解酶、黑色素和毒素等致病因子的鉴定及合成相关基因的克隆与功能鉴定[9-11]。然而对该菌生长发育调控研究鲜有报道。植物病原真菌的生长速度影响其在寄主体内的扩展与蔓延，从而在一定程度上影响病害的发展进程。因此，通过对病原菌生长发育的分子机理的研究，将可以加深对该病原菌生长发育调控的认识，也可能为开发能够抑制病原菌发展的新型制剂提供一些新的靶位点。从而拓宽人们对病原菌防治的视野。本实验通过农杆菌介导的方法获得一个生长缓慢的突变体，利用接头PCR技术获得该突变体T-DNA右翼序列，这将为下一步克隆该基因，从分子水平上研究控制病原菌生长的分子机理奠定基础。

1 材料与方法

1.1 转化材料与质粒

将野生型弯孢叶斑病菌CX-3置28℃黑暗培养3 d后收集其分生孢子，配制成浓度为104个·mL-1的弯孢分生孢子悬浮液，然后涂布在玻璃纸上，在30℃黑暗条件下培养6 h后做转化受体材料。……