应用肝细胞生长因子凝胶修复慢性声带瘢痕

吴修法 摘译 徐洁洁 审校

南京医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科(南京 210029)

慢性声带瘢痕(chronic vocal fold scar)一般继发于喉部创伤、炎症或者手术之后，由于声带固有层组织结构破坏而使声带生物力学功能发生改变，可导致声门功能障碍和严重的发声困难。以往组织学研究发现，声带瘢痕存在细胞外组织结构的改变，如：I型胶原沉积物密集或者紊乱，弹性蛋白和核心蛋白多糖减少，纤连蛋白增加以及透明质酸(hyaluronic acid,HA)降低等。这些组织学变化说明慢性声带瘢痕中成纤维细胞的表型合成异常，从而导致声带组织僵硬，因此，若使声带瘢痕恢复振动功能，改变纤维母细胞的表型以及修复细胞外基质结构是必需的。

肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)是一种多功能的多肽，其在胚胎形成、血管生成、器官重建和创伤修复方面起重要作用。HGF具有抗纤维化功能，在动物模型的研究中已证实其对肝、肾、肺的纤维组织具有预防纤维化及溶解纤维组织的作用。另有研究表明HGF具有治疗声带瘢痕的作用，其可增加成纤维细胞中透明质酸的产生并降低胶原沉积。

以往研究表明HGF对声带急性损伤具治疗作用，但存在HGF在声带注射位点扩散过快、存留时间太短的缺点。本研究建立一种新型的凝胶药物释放系统(drug delivery system，DDS)以减缓HGF在声带内的释放、扩散，并通过犬动物模型观察HGF-DDS对慢性声带瘢痕的修复作用。实验用水凝胶由戊二醛和酸明胶交联化学反应而获得，将1 μg的HGF加入水凝胶中制备成HGF水凝胶。选用8只米格犬作为实验对象，在直达喉镜下将一侧声带固有层撕剥达肌层使声带瘢痕化，对侧声带作为正常对照。6个月后，将0.5 ml HGF水凝胶(含HGF 1 μg)液通过经口声带注射器注入实验组4只犬的瘢痕声带上皮下(HGF治疗组)；另将0.5 ml PBS水凝胶液(含PBS 1 μg)注入另四只狗的瘢痕侧声带内(对照组)，1个月后再注射1次以强化疗效。术后9个月所有犬安乐死，取喉体进行声带振动检测及组织学检查。应用压力传感器检测声门下压力,通过高速数字图像系统记录声带振动状态,以发声压力阈值(phonation threshold pressure，PTP)评估声带黏膜振动，并经公式计算振幅率(amplitude ratio,AR)及标准声门间隙(normalized glottal gap,NGG)。光学显微镜下观察每侧声带固有层胶原、弹性蛋白及透明质酸，通过检测固有层厚度判断瘢痕收缩程度。

振动学检查结果表明：HGF治疗组声带黏膜振动明显好于对照组，对照组损伤侧声带呈弓形并且黏膜振动受限。统计学分析表明治疗组发声压力阈值(PTP)显著低于对照组，振幅率(AR)显著高于对照组，而两组间标准声门间隙(NGG)差异无统计学意义。组织学检查示HGF治疗组声带恢复及组织收缩情况明显好于对照组。HGF治疗组紊乱的胶原沉积很少，弹性蛋白和透明质酸排列规则，与对侧未损伤的声带相似，固有层的厚度亦接近正常；而对照组有过多的胶原沉积，弹性蛋白和透明质酸成分均降低，固有层明显变薄。

该研究通过犬动物模型实验证实HGF—DDS能有效改善慢性瘢痕声带的振动特性。HGF可减少过度的胶原沉积及组织收缩，并促进弹性蛋白和透明质酸的修复，对慢性声带瘢痕的治疗具有应用前景。