罗非鱼热休克蛋白70在毕赤酵母中的表达与纯化

陈明,王秋华、2,王瑞,黄婷,梁万文,李超,雷爱莹,陈福艳,余晓丽,甘西

(1.广西水产研究所,广西南宁530021;2.广西大学动物科学技术学院,广西南宁530005)

罗非鱼热休克蛋白70在毕赤酵母中的表达与纯化

陈明1,王秋华1、2,王瑞1,黄婷1,梁万文1,李超1,雷爱莹1,陈福艳1,余晓丽1,甘西1

(1.广西水产研究所,广西南宁530021;2.广西大学动物科学技术学院,广西南宁530005)

以尼罗罗非鱼血液mRNA反转录获得编码罗非鱼Hsp70完整cDNA,重组构建罗非鱼真核表达载体pPIC9K/rtHsp70;在毕赤酵母Pichia pastoris KM71中表达重组罗非鱼的热休克蛋白70(rtHsp70),对表达上清液进行SDS-PAGE及Western blot分析;采用亲和层析、HiTrap Desalting预装柱脱盐纯化目的蛋白。结果表明:克隆至pMD载体上的基因与目的基因完整编码区序列完全一致;诱导表达上清液经SDS-PAGE及Western blot分析,上清液中蛋白条带大小与目的蛋白相对分子质量大小一致;每升诱导上清液可以获得约2 mg纯化蛋白。本研究中获得的rtHsp70毕赤酵母工程菌及纯化的rtHsp70为后期rtHsp70-肽疫苗研究奠定了基础。

重组罗非鱼热休克蛋白70(rtHsp70);基因表达;毕赤酵母

热休克蛋白Hsp70相对分子质量约70 000,具有高度保守序列,在受到环境胁迫后能大量表达。因此,鱼类等水生生物Hsp70在各种应激条件下表达的变化是鱼类热休克蛋白被发现以来的研究热点。有学者曾提出,热休克蛋白可作为一种生物指标,通过检测水生生物Hsp70表达水平,对水环境进行监测。但是,Hsp70的表达水平并不总是与有害因素的作用强度平行,其机制较为复杂,监测水质时不能孤立考虑单项因素,因此利用Hsp70作为水环境污染的监测指标有它的局限性[1-2]。……