通过花粉管通道法导入红树总DNA获得耐盐紫花苜蓿T0代植株及其RAPD验证

张立全,牛一丁,郝金凤,哈斯阿古拉

(内蒙古大学生命科学学院内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点实验室,内蒙古 呼和浩特010021)

土壤盐碱化是一个世界性的问题,培育抗盐转基因作物新品种,充分利用盐碱地,具有重要意义[1]。利用转基因技术进行育种即可以有效地打破物种界限,又可达到定向改良植物的目的[2]。然而,植物的耐盐性是多种耐盐代谢、生理过程综合表现的结果,受多个基因控制[3]。因此,培育转基因耐盐植物时,转移单个基因往往只能获得部分耐盐性。为了获得具有应用价值的耐盐植物品种,可能需要直接转移耐盐供体基因组DNA,花粉管通道法(pollen-tube pathway)[4]转基因技术的创建使其成为可能。利用盐生植物DNA直接导入受体来培育耐盐植物已有许多成功的报道。林栖凤等[5-8]开展了耐盐作物分子育种研究,将海岸盐生植物红树(Rhizophora apiculata)DNA 导入番茄(Lycopersicon esculentum)[5]、豇豆(Vigna sesquipedalis)[6]、茄子(Solanum melongena)[7]、辣椒(Capsicum annuum)[8],获得了耐盐能力明显增强的变异后代。肖军等[9]将碱蓬(Suaeda salsa)总DNA导入番茄,获得了抗盐植株。以上研究证实直接转移供体基因组DNA进行作物耐盐性育种是可行的。

紫花苜蓿(Medicago sativa)是世界上栽培面积最大的优质豆科牧草[10,11],而利用基因工程技术来提高苜蓿抗寒、抗旱、耐盐碱能力以及改良其营养品质已成为苜蓿发展和研究的新趋势和重点[12]。张改娜和贾敬芬[13]将豌豆清蛋白1(PA1)基因转入紫花苜蓿,结果显示转PA1基因再生植株中蛋氨酸和半胱氨酸的含量提高4倍。Winicov和Bastola[14]将转录因子基因Aflin1导入苜蓿,超表达Af lin1的愈伤组织可抵抗171 mmol/L NaCl的胁迫作用。……