子痫前期患者血清sHLA-G与外周血NK细胞的相关性研究

孙 炜，孙 炯

(1盐城卫生职业技术学院，江苏盐城224006;2盐城市亭湖区人民医院)

子痫前期是妊娠期特有的疾病，是严重威胁母婴安全的产科并发症，其发病机理至今尚未完全阐明［1］。研究表明人类白细胞抗原 G(HLA-G)在重度子痫前期患者胎盘组织中表达低下，揭示HLA-G在妊娠期高血压疾病中可能起着非常重要的作用［2，3］，子痫前期患者胎盘组织 HLA-G 表达缺陷可导致自然杀伤细胞(NK细胞)功能异常，从而影响母胎免疫耐受［4］。2008年7月～2010年3月，我们通过测定血清中可溶性HLA-G(sHLA-G)以及外周血NK细胞的表达及相关性分析，探讨sHLA-G在子痫前期发病中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 我院分娩产妇121例，其中轻度子痫前期患者45例(实验A组)，重度子痫前期患者34例(实验B组)，正常妊娠妇女42例(对照组)。重度子痫前期及轻度子痫前期的诊断符合临床标准［5］。各组孕妇的年龄及孕周比较差异无统计学意义(P＞0.05)。各组孕妇均无肝炎、结核等急、慢性传染病史，无高血压、心脏病、免疫治疗史，胎儿性别及体质量、胎盘重量差异无显著性。

1.2 血清sHLA-G水平测定 采用酶联免疫吸附法(ELISA)双抗体夹心法检测。正常妊娠孕妇分别于建卡时、中孕、临产前抽取肘静脉血3 ml，子痫前期患者于临产前采集肘静脉血3 ml。所有血标本放置在4℃冰箱，静置4 h，待自凝后5 000 r/min离心10 min，分离血清，置于 －80℃冰箱冻存备用。ELISA试剂盒购自Biovendor公司，所有操作严格按试剂盒说明书进行。用Bio-Tek EL×800酶标仪于450 nm波长测定各样本吸光值。以标准品已知浓度的对数及光吸收值分别为X轴和Y轴，形成标准曲线，用Curve Expert软件处理数据产生半对数图，依据各待测样品测得的吸光值计算其sHLA-G水平。

1.3 外周血NK细胞数量检测 以免疫组化SP法测定。淋巴细胞分离液购自中国医学科学院，NK细胞检测试剂盒(包括鼠抗人CD16、CD57单克隆抗体、生物素偶联的兔抗鼠IgG抗体、链霉亲和素-HRP、过氧化物酶底物)购自北京元康医学技术公司。无菌取受试者空腹外周静脉血各2 ml，肝素抗凝，按常规方法分离出外周血单个核细胞(PBMC)后，严格按试剂盒说明进行操作，并按标准判定NK细胞百分比。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行统计。各组数据以±s表示，结果采用单因素的方差分析(组间比较采用LSD法)，以及Pearson相关分析。以P≤0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 血清中sHLA-G表达比较 对照组早孕期、中孕期、晚孕期分别为(14.02 ±5.31)、(13.64 ±5.09)、(12.58 ±4.66)ng/ml，F=6.578，P ＞ 0.05。对照组晚孕期、实验A组和实验B组分别为(12.58±4.66)、(10.74 ±3.21)、(9.06 ±2.66)ng/ml，F=8.776，P=0.001;组间两两比较，P 均 ＜0.05。

2.2 外周血NK细胞百分比比较 实验A组、实验B组及对照组晚孕期分别为(16.14±2.93)%、(18.55 ±3.15)%及(13.15 ±2.60)%，F=33.361，P=0.001;组间两两比较，实验A、B组均高于对照组(P=0.001)。

2.3 相关性分析 子痫前期患者外周血NK细胞百分比和血清sHLA-G存在负线性相关关系，(r=－0.401，P=0.001)。

3 讨论

HLA-G主要在人的胎盘组织中表达，定位于母胎界面绒毛外滋养细胞上［6］，在羊水、脐带血以及母体血循环中也有一定量的表达。HLA-G的正常表达对孕卵的着床及维持起着重要作用，子痫前期患者及不明原因的习惯性流产患者胎盘、血清中HLA-G表达下降，使滋养细胞侵蚀分化过程下降，滋养细胞不易侵入子宫蜕膜及重铸螺旋动脉，绒毛着床过浅、血管发育欠佳，不能有效供应胎盘营养，且滋养细胞易受母体免疫系统的攻击，使胎盘生长发育受限，可导致子痫前期、流产等［7，8］。绒毛外滋养细胞是与母体组织直接接触的胚胎细胞，其细胞表面所表达的HLA-G可通过与NK细胞表面抑制性受体结合，抑制NK细胞的胞毒活性，从而维持母胎免疫耐受［9］。

外周血sHLA-G可以反映体内HLA-G表达水平，sHLA-G不仅可在母胎界面致免疫耐受，并影响整个免疫系统的作用。本研究结果显示，子痫前期组与正常妊娠组间sHLA-G的表达存在显著差异，重度子痫前期组亦低于轻度子痫前期组，说明sHLA-G分子的低表达与子痫前期发病密切相关，并可能促进子痫前期的病程发展，sHLA-G分子的表达与子痫前期病情的轻重呈负相关。通过对外周血NK细胞数量比较，子痫前期患者外周血NK细胞百分比均显著高于正常孕妇，且随血清sHLA-G的下降而呈升高趋势。子痫前期患者滋养细胞HLA-G存在转录及蛋白水平缺陷，可能由此而引发NK细胞对滋养细胞的杀伤作用［10］。

迄今为止，母胎界面的免疫调控机制尚未被系统性地阐明，HLA-G在母胎界面发挥了重要的免疫作用，进行这一方面的研究，对异常妊娠及移植免疫分子机制的认识有着重要的意义。在此基础上，进一步扩大样本量，并与临床分型综合分析，可为临床诊断与治疗提供理论基础。

［1］侯彩英，闵保华，蔡颖，等.sHLA-G在子痫前期患者的表达及意义［J］.现代生物医学进展，2008，8(10):1905-1906.

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［9］韩子英，王利，马宝骊，等.HLA-G分子在体外抑制NK细胞杀伤效应的研究［J］.上海免疫学杂志，2001，21(4):221.

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