运动与复方丹参合剂联合应用对去卵巢大鼠骨体积和骨量的影响

陈鸿生 宋冰 张兆强

1 广东医学院体育部（广东 湛江 524023） 2 湛江师范学院基础教育学院 3 广东医学院生理学教研室

补充雌激素是防治绝经后骨质疏松的主要措施之一，但基于雌激素对心血管系统及乳腺、子宫的毒副作用，在临床使用中具有一定的局限性。植物性雌激素以其对子宫乳腺相对较小的副作用［1，2］，在绝经后骨质疏松的防治中逐渐受到人们的关注。但一般植物中雌激素的含量较低，服用剂量和疗效需进一步研究，通过联合应用其他措施能否加强植物性雌激素的疗效值得探讨。运动对骨质疏松的防治作用已得到公认。丹参中所含的丹参酮有雌激素活性。本研究用去卵巢的方法建立大鼠骨质疏松模型，用丹参配以淫羊藿、牡蛎等制成复方丹参合剂，观察运动与复方丹参合剂联合应用对去卵巢大鼠骨体积和骨量的影响，以了解运动能否加强复方丹参合剂的作用，从而为骨质疏松症防治措施的研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

健康4月龄Sprague-Dawley（SD）雌性大鼠48只（广东医学院实验动物中心提供，实验动物合格证书编号：粤检证字2002A013号），体重325±15 g，动物编号，采用抽签法随机分成6组：正常对照组、假去卵巢组、去卵巢组、去卵巢＋复方丹参合剂组、去卵巢＋运动组、去卵巢＋复方丹参合剂＋运动组，每组8只。实验期间，各组大鼠自由摄食标准固体饲料（广东省卫生厅南海实验动物中心生产），自由饮水。各组大鼠照明、通风、温度、湿度等饲养环境条件相同。

1.2 去卵巢动物模型的建立

去卵巢组、去卵巢＋复方丹参合剂组、去卵巢＋运动组和去卵巢＋复方丹参合剂＋运动组大鼠用10 g/L戊巴比妥钠溶液腹腔麻醉（3.0 ml/kg体重），无菌条件下，经腹部正中线切口，切除双侧卵巢。切下的卵巢经组织学鉴定确认。假去卵巢组手术过程及操作与上述各组相同，但不切除卵巢，只切除腹腔内一小块脂肪组织，经组织学鉴定确认。

1.3 动物给药

去卵巢＋复方丹参合剂组和去卵巢＋复方丹参合剂＋运动组大鼠给予复方丹参合剂溶液灌胃。复方丹参合剂由丹参、淫羊藿、牡蛎等多种药物的醚和水提取物混合制成。将复方丹参合剂原液用蒸馏水稀释4倍后，按10 ml/kg体重的剂量于去卵巢手术后第2天开始灌胃，每天1次，持续11周。

1.4 动物运动训练

去卵巢＋运动组和去卵巢＋复方丹参合剂＋运动组于去卵巢术后第7天开始，在YD-1型大鼠专用跑台［3］上进行中等强度［4］运动训练，每周5天，每天45 min，速度16 m/min，跑道倾角0，持续10周。

1.5 标本收集与测定

各组大鼠分别于实验后第11周末动脉放血处死，取左股骨，剥净软组织，测量以下指标：

（1）骨直径：在量取左股骨的长度后，分别于右股骨的近端1/3点、中点、远端1/3点，用游标卡尺量取其最大外径及最小外径，将6个数值相加后平均，作为骨直径的数值。

（2）骨体积：根据阿基米德（Archimedes）原理，浸没在液体中的不规则物体的体积等于其排开液体的体积。将左股骨置于装有蒸馏水的量筒中，并使其完全浸没，通过量筒中液体所示刻度的前后变化测量右股骨的体积（cm3）。

（3）骨湿重：左股骨剥净软组织后，即置于1/100000分析天平上称重。

（4）骨干重：左股骨称湿重后置烤箱中，于110ºC温度下烤48 h至恒重，于1/100000分析天平上称骨干重。

（5）骨灰重：左股骨称干重后将其炭化，后在箱式电阻炉（SX 2-4-10型）中700℃ 6 h使其灰化，用1/100000分析天平称灰重。

1.6 统计学分析

应用SPSS13.0统计软件处理数据。各组数据以均数±标准差（±s）表示，多个均数间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

表1显示，去卵巢组大鼠骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等均较假去卵巢组显著降低（P < 0.01）。假去卵巢组大鼠各项指标与正常对照组比较均无显著性差异（P > 0.05）。去卵巢＋复方丹参合剂组大鼠骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等较去卵巢组均显著增加（P < 0.01），但仍显著低于假去卵巢组（P < 0.01）。去卵巢＋运动组大鼠骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等均较去卵巢组显著增加（P < 0.01），但仍显著低于假去卵巢组（P < 0.01）。去卵巢＋复方丹参合剂＋运动组大鼠骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等均较去卵巢＋复方丹参合剂组和去卵巢＋运动组显著增加（P < 0.01）。去卵巢＋复方丹参合剂＋运动组大鼠骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等与假去卵巢组比较差异均无统计学意义（P> 0.05）。

表1 各组大鼠骨体积和骨量比较

3 讨论

去卵巢大鼠模型是一种高转换型骨质疏松模型，已被公认为“金标准”模型。在本实验中，去卵巢组与假去卵巢组大鼠比较，骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等指标均显著降低，说明去卵巢可使大鼠骨体积和骨量下降。假去卵巢组大鼠与正常对照组大鼠比较，各项指标均无显著性差异，说明手术本身对大鼠骨体积和骨量无明显影响，也说明去卵巢组大鼠与假去卵巢组大鼠各项指标的差异是切除卵巢引起的。

复方丹参合剂由丹参、淫羊藿、牡蛎等多种药物的醚和水提取物混合制成。《神农本草经》认为牡蛎“久服强骨节，……”。《海药本草》认为牡蛎“久服补肾正气，……”。丹参为中医活血化瘀要药。丹参中含有的丹参酮有雌激素活性，对免疫功能有促进作用。淫羊藿有雄激素样作用，含微量元素锌、锰、铁等，能促进垂体分泌生长激素。牡蛎壳含80%～95%的钙盐（碳酸钙、磷酸钙、硫酸钙）和镁、铁、硅、铝等元素［5］。去卵巢大鼠给予复方丹参合剂溶液灌胃后，对由于去卵巢所引起的大鼠骨矿盐丢失和骨元素代谢紊乱有改善作用，但其作用与剂量有关，小剂量组效果并不理想［6，7］。本研究观察到，去卵巢大鼠给予复方丹参合剂溶液灌胃后，其骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等指标均较去卵巢组显著增加，但仍显著低于假去卵巢组，说明复方丹参合剂对去卵巢大鼠骨体积和骨量虽有一定改善作用，但效果不甚理想，与上述文献报道相似。

运动对骨代谢的影响及其在骨质疏松症中的防治作用已受到众多关注。单纯运动或运动和雌激素联合应用可改善去卵巢大鼠骨生物力学性能［8］，增加去卵巢大鼠股骨骨密度，提高骨硬度和增强骨的抵抗变形能力［9］。Tromp 等［10］和 Renno 等［11］的研究证实，机械负荷或运动能使去卵巢大鼠骨量和骨密度增加。适宜强度游泳运动对生长发育期大鼠骨发育、骨组织形态和结构力学特性有促进作用［12，13］。跑台运动能通过刺激骨形成、抑制骨吸收而促进生长期大鼠胫骨骨量积累［14］。Kemmler等［15］和 Engelke等［16］研究发现，运动能抑制绝经后妇女受力部位骨密度下降，增加骨直径和骨矿物质含量。运动可提高青春前期和青春期受试者的骨量［17］。本研究结果显示，去卵巢大鼠给予中等强度的运动训练后，其骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等指标均较去卵巢组显著增加，但仍显著低于假去卵巢组，说明运动虽然对改善去卵巢大鼠骨体积和骨量有一定作用，但效果还不甚理想。

前已述及，单纯使用复方丹参合剂或给予运动训练对改善去卵巢大鼠骨体积和骨量有效果但均不甚理想。本研究发现，去卵巢＋复方丹参合剂＋运动组大鼠骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等指标均较单纯使用复方丹参合剂组或单纯给予运动训练组显著增加，说明运动与复方丹参合剂联合应用对改善去卵巢大鼠骨体积和骨量的作用优于单纯使用复方丹参合剂或单纯给予运动训练，表明运动和复方丹参合剂对去卵巢大鼠骨体积和骨量的改善作用有协同效应。去卵巢组大鼠采用中等强度运动训练与复方丹参合剂联合干预后，其骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等与假去卵巢组比较差异均无统计学意义，说明大鼠骨体积和骨量基本上恢复至对照水平。

综上所述，运动对复方丹参合剂改善去卵巢大鼠骨体积和骨量的效应有加强作用。临床上使用复方丹参合剂治疗骨质疏松症时，可考虑联合应用适量运动，以增强疗效。

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