ClassⅠ新城疫病毒核衣壳蛋白在体外细胞感染过程中表达定位的检测

孙英杰，陈鸿军，詹 媛，仇旭升，于 洋，于圣青，丁 铲

(中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241)

新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)属于禽副黏病毒血清Ⅰ型(AMPV-Ⅰ)，可以感染200余种禽类和哺乳动物，是危害养禽业的主要病原[1]。根据系统发育进化树可将NDV分为两个群，即ClassⅠ(15198 nt)和 ClassⅡ(15192 nt或 15186 nt)[2]。目前报道的可导致新城疫流行的大多数强毒株属于ClassⅡ，ClassⅠ中大部分为低致病力的弱毒株(loNDV)或无毒株，这些loNDV普遍存在于家禽和野鸟体内[3]。于圣青等从野生水禽体内分离到一株非致病性NDV毒株，当该病毒株在SPF鸡体内经过9次气囊接种(9a)和5次脑内接种(5b)传代后，其变异为速发型NDV，从而证明NDV弱毒株可以在鸡体内经传代发生毒力变异[4]。

NDV基因组为单链、不分节段的负链RNA，编码6种结构蛋白：核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素神经氨酸酶(HN)和大分子蛋白(L)[5]。其中，NP基因全长为1470 bp，编码490个氨基酸。每个NP单体与基因组RNA的6个核苷酸结合，保护RNA免受核酸酶的侵害，并可能是NDV复制遵循“6碱基原则”的基础[6]。本研究通过制备NDV NP的特异性单克隆抗体(MAb)及抗血清，分析在NDV感染细胞过程中，NP的亚细胞动态定位情况，为深入开展N P与病毒增殖的研究奠定基础。

1 材料和方法

1.1 病毒株、细胞系及实验动物 第15代NDV分离株和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0均由本实验室保存；将野生水禽体内分离的NDV低毒力株(Goose/Alaska/415/91)在鸡气囊中连续传代9次，脑内传代5次，获得强毒株9a5b[4]，按100 EID50剂量接种9日龄SPF鸡胚尿囊腔，收获尿囊液，测定病毒效价后备用；SPF级BALB/c小鼠和昆明小鼠均购自上海市莱克斯实验动物中心；……