奥美沙坦改善内皮素诱导的大鼠高血压与氧化应激

姚 丽，徐天华，张少青，魏 敏，葛丹梅，王力宁

肾素血管紧张素系统(Renin-angiotensin system，RAS)和内皮素(Endothelin，ET)系统在高血压及心血管损伤的发生发展中发挥重要作用［1-2］。有研究显示，ET参与 AngⅡ诱导的高血压［2］，而RAS在ET诱导高血压中的作用尚不清楚。另有文献报道，ET可刺激活性氧片段(Reactive oxygen species，ROS)产生［3］。本研究观察 ET-1 诱导的高血压大鼠氧化应激状态和RAS系统，包括血浆肾素活性(Plasma renin activity，PRA)、AngⅡ和血管紧张素原(Angiotensinogen，AGT)水平，脉管系统ACE和AT1受体的表达变化;同时，观察AngⅡ受体拮抗剂(AT1receptor blockade，ARB)奥美沙坦在此模型中对血压和氧化应激的影响，旨在探讨RAS在ET诱导的高血压和氧化应激中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 5～6周雄性SD大鼠随机分为4组:①对照组(1%氯化钠慢性灌注，n=7);②ET-1慢性灌注组［2.5 pmol/(kg·min)，n=7］;③ET-1+奥美沙坦组［6 mg/(kg·d)，n=7］;④ET-1+非特异性抗高血压药肼苯哒嗪治疗组［15 mg/(kg·d)饮水中给入，n=6］。戊巴比妥(50 mg/kg，腹腔内注射)麻醉下，渗透性微泵(2ML2，Alza Co.)植入大鼠颈背部皮下与血管内插管(PE-60)相连接。奥美沙坦(CS-866，日本三共制药有限公司惠赠)随食物给入。

Tail-cuff技术测量清醒状态下大鼠第0、7、14天尾部血压。第14天时斩首处死大鼠，冷冻试管(含 EDTA 5 mmol/L、依那普利20 mol/L、1，10 邻菲咯啉1.25 mmol/L、抑胃肽A 10 mol/L)快速收集血液，用以检测AGT和AngⅡ。另用冷冻试管(含EDTA 5 mmol/L)收集血标本以检测 PRA、TBARS水平。快速剥取主动脉，去除其周围组织，取5 mm的主动脉环检测产物，其余主动脉标本液氮速冻，－80℃深冻保存。

1.2 实验方法

1.2.1 Western blotting检测血浆AGT水平和主动脉ACE与AT1受体的表达 10 μg蛋白质样品加入8%SDS-聚丙烯酰胺凝胶中，80 V 30 min、120 V 60 min电泳结束后，在90 V 90 min、电流＜0.33 A下，将蛋白转至硝酸纤维素膜上。5%去脂牛奶/PBS-T室温下阻滞1 h，PBS-T洗膜2×10 min，一抗(羊抗鼠 AGT抗体，澳大利亚……