化学去细胞异体神经移植修复鼠全面神经的实验研究

赵 斌，杨 昱，詹胜锋，彭 江，王 玉，赵 喆，任志午，张 莉，许文静，卢世璧

(中国人民解放军总医院，北京100853)

化学去细胞同种异体神经(CEAN)最大限度去除了免疫原性物质，同时较完好地保存了神经内部结构和细胞外基质的活性成分，可作为自体神经移植的替代材料。然而，前期研究［1，2］局限于单根单支周围神经的长度，对于复杂部位的周围神经缺损的修复，如具有丛状结构的臂丛神经缺损、“一主干多分支”的神经(如尺神经手部分支、面神经)缺损，国内外鲜有报道。本研究尝试运用化学萃取法处理大鼠全面神经，修复大鼠全面神经10 mm缺损，探讨CEAN修复特殊部位周围神经缺损的效果。

1 材料与方法

1.1 实验动物及主要试剂、设备 成年SD大鼠40只，体质量(250±20)g，由解放军总医院实验动物中心提供。Triton X-100液、脱氧胆酸钠、荧光金、快蓝(美国Sigma公司)，爱德华牌TSJ-1A型自动组织脱水机(天津天利航空机电公司)，BMJ-1型组织包埋机(天津天利航空机电公司)，Leitz 1516型组织切片机(德国Leica公司)，BH-2 OLYMPUS生物显微镜(日本OLYMPUS公司)。

1.2 化学去细胞同种异体面神经制备 取5只SD大鼠，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，无菌条件下取双侧面神经，长约15 mm，去除神经周围外膜，采用0.4%脱氧胆酸钠与0.3%Triton X-100处理坐骨神经制备CEAN，60Co辐照1 h，置于2 ml PBS液(pH 7.4)4℃储存备用。

1.3 自体面神经冻融处理 在无菌条件下取5只SD大鼠双侧面神经，将切断的全面神经放入装有10%甘油冻存管，纱布包裹后放入液氮3 min，再将冻存管于37℃水浴3 min，取出面神经，生理盐水冲洗后4℃储存备用。

1.4 面神经缺损动物模型制备及分组 取30只SD大鼠，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，无菌条件下显露左侧面神经主干及5个分支，近端切断面神经主干，从该断点至各分支10 mm处切断各分支，造成各分支10 mm的缺损。……