骨形态发生蛋白微球对犬骨髓基质细胞增殖和分化的影响

姚 琦，姜 华，张立海，黄 鹏，崔 庚，唐佩福

(1首都医科大学附属北京世纪坛医院，北京100038;2中国人民解放军总医院)

重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)等外源性生长因子的应用研究一直是组织修复再生和组织工程领域最活跃的课题之一。国内外学者进行了大量生长因子缓释载体的研究［1～3］，其中聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)不但具有生物相溶性好、无免疫反应等特点，而且可通过调节乳酸和乙醇酸二单体的比例得到不同降解速率的载体材料，因而目前被广泛用作药物载体材料。本实验于2010年完成，旨在观察骨形态发生蛋白微球对体外培养的犬骨髓基质细胞(MSC)增殖及分化影响。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 PLGA购自山东省医疗器械研究所;rhBMP-2购自北京军事医学科学院;DMEM培养基购自美国Gibco公司;hhuyuyzaz肝素、抗坏血酸、地塞米松、β-甘油磷酸钠、胰蛋白酶、牛血清白蛋白购自美国Sigma公司;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒购自南京建成生物制品公司;PVA聚乙烯醇、二氯甲烷购自北京化学试剂公司;Ⅰ型胶原免疫组化试剂盒购自武汉博士德公司。

1.2 方法

1.2.1 骨形态发生蛋白微球制备 复乳—溶剂挥发法［4］制备微球，rhBMP-2干粉10 mg用盐酸胍溶液溶解，取出100μl PBS的rhBMP-2溶液，并加适量的牛血清白蛋白做保护剂，混匀，形成内水相，100 mg的PLGA溶于0.7 ml二氯甲烷中形成油相(含2.5%司盘－20)，内水相加入油相中冰浴超声乳化，形成初乳，将初乳加入到10ml外水相中(含1%PVA、0.5%吐温 －20)，800 r/min搅拌 4 h挥尽溶剂，过滤，蒸馏水洗涤，真空冻干，4～8℃储存。

1.2.2 犬MSC的分离与培养 实验动物以10%戊巴比妥钠25 mg/kg静脉麻醉，腰骶部剃毛、消毒、铺巾。……