不同体外诱导时间对BMSCs成软骨分化的组织学特性影响的研究

周栩 周广东 张路 刘豫 朱吉 曹谊林

随着定向诱导分化技术的逐步成熟，骨髓间充质干细胞（BMSCs）逐渐成为组织工程种子细胞的最佳来源之一，目前已经被大量用于促进软骨缺损修复的实验研究，良好而有效的诱导方法是将BMSCs成功用于软骨修复的关键[1]。地塞米松与TGF-β1、IGF-I联合应用，可有效地促进BMSCs表达软骨的特征性细胞外基质[2-4]。虽然以BMSCs为种子细胞在体外已经可以成功构建出组织学结构、生物化学组成与正常软骨类似的组织工程化软骨，但是体外不同诱导时间所构建的软骨的组织学特性，及相互之间的关系，仍缺乏深入研究。明确经不同时间诱导的软骨样组织的组织学特性，对于把握组织工程组织回植体内的最佳时机至关重要。本实验以猪的BMSCs为种子细胞，在体外分别进行成软骨诱导1周和4周，并以未经诱导的BMSCs和软骨细胞为对照，分析和比较不同体外诱导时间对BMSCs体外成软骨分化的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

长枫杂交猪（n=10），1～2 月龄，6～8 Kg，雌雄不限；DMEM 培养液（Gibco 公司）；10%胎牛血清（Hyclone公司）；0.25%胰蛋白酶 （Sigma公司）；TGF-β1（Intergen 公司，每支 5 μg）；IGF（Intergen 公司，每支50 μg）；地塞米松（Sigma 公司，2 mg/mL）；鼠抗人Ⅱ型胶原单克隆抗体（Dako公司）；辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗（Dako公司）；阿利新蓝8-GX（Sigma公司）；硫酸软骨素标准品（Sigma公司）；100 mm培养皿，0.22 μm针孔过滤器，50 mL离心管（Falcon公司）；编织聚羟基乙酸，聚乳酸，三氯甲烷（Sigma公司）； 倒置相差显微镜 （Nikon公司，Eclipse TS100）；精密电子天平 （Mettler Toledo公司）；DU-640紫外分光光度计（Beckman Coulter公司）；激光共聚焦显微镜（Leica公司，SP5）。

1.2 实验方法

1.2.1 猪骨髓间充质干细胞的分离、培养和……