2型糖尿病患者外周血淋巴细胞亚群及Treg细胞检测及临床应用

迟 林，李昊淼，许晓风

(首都医科大学附属北京同仁医院，北京100730)

近年来糖尿病(DM)炎症发病学说逐渐形成，认为DM是一种自然免疫和炎症性疾病，是代谢综合征的重要组成。炎症的发生与机体的免疫状态密切相关，已有文献表明2型DM(T2DM)的发病与免疫功能紊乱有关，本研究采用流式细胞测定技术检测T2DM患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及Treg细胞的变化，探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2010年3～9月在我院就诊的T2DM患者120例，其中男74例、女56例，年龄35～81岁，均符合1997年美国糖尿病学会诊断标准。经眼科及内科检查，将患者分为有血管病变组68例，男39例、女29例，年龄43～81岁;无血管病变组52例，男30例、女22例，年龄37～68岁;对照组40例为我院健康体检者，男20例、女20例，年龄20～65岁。

1.2 仪器与试剂 美国Beckman Coulter FC500流式细胞仪，CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5，CD16+56-PE/CD3-FITC，同型对照 IgG1mouse FITC/IgG1mouse PE，CD4-PC5，CD25-PE，同型对照IgG2a mouse PE，IgG1mouse PC5，Lysing Solution，PBS均为美国Beckman Coulter公司生产。

1.3 实验方法 所有观察对象空腹取静脉血2 ml于EDTA-K2真空抗凝采血管内，混匀，室温保存。取不同荧光标记抗体各20 μl加入100 μl抗凝外周血中，避光孵育 20min，加入 Lysing Solution 500 μl，避光孵育10min，加入PBS 500 μl避光孵育10min，1 500 r/min离心5min，洗涤2次，加入PBS 1 000 μl，上机检测，记录阳性细胞百分率。

1.4 统计学方法 全部数据经SPSS11.0统计软件处理，数据采以±s表示，两样本均数比较采用t检验，以P≤0.05为有统计学差异。

2 结果

表1 T2DM患者与正常对照组外周血淋巴细胞亚群检测结果(%，±s)

表1 T2DM患者与正常对照组外周血淋巴细胞亚群检测结果(%，±s)

注:与对照组比较，*P ＜0.05

组别 n CD3+ CD4+/CD3+ CD8+/CD3+ CD4+/CD8+ CD16++CD56+/CD3－CD4+CD25+无血管病变组 52 58.44 ±7.81* 36.56 ±4.56 26.33 ±4.98* 1.31 ±0.44* 19.02 ±6.63* 9.39 ±2.12*伴血管病变组 68 57.65 ±7.35* 36.02 ±4.32 25.47 ±4.26* 1.29 ±0.52* 18.76 ±5.98* 8.99 ±2.03*对照组 40 65.93 ±6.76 37.17 ±5.81 23.66 ±3.66 1.43 ±0.42 22.46 ±6.75 10.43 ±2.07

3 讨论

NK细胞被誉为天然免疫核心细胞，人类NK细胞的特征性表面标志是CD56和CD16分子，不表达CD3分子。……