微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白抗体检测ELISA方法的建立

刁玉梅，宫鹏涛，李 巍，苏利波，黄祥盛，高华义，李 赫，胡进平，李建华，张西臣

(吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春130062)

隐孢子虫(Cryptosporidium)是普遍存在的胃肠道寄生性原虫，能引起人类与家畜的群体腹泻[1-3]。目前，还没有有效的治疗方法治疗人的隐孢子虫感染，而现行的常规诊断方法费时、费力、检出率低；间接荧光抗体试验和PCR方法对仪器设备和试剂的要求较高，因此建立一种快速、特异性较高且可直接判定结果的诊断方法是十分必要的。

分子流行病学研究结果显示出大多数人隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是由人隐孢子虫(Cryptosporidium hominis，C.parvumgenotypeⅠ)和微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum，C.parvumgenotypeⅡ)引起的[4]。微小隐孢子虫病毒(Cryptosporidium parvumvirus，CSpV)是1997年Khramtsov在牛犊中分离出来的C.parvum卵囊中发现的，该病毒含有含larger dsRNA(L-dsRNA)和 smaller dsRNA(S-dsRNA)， 其中S-dsRNA编码病毒衣壳蛋白[5]。之后，Khramtsov又发现所有C.hominis和C.parvum都含该dsRNA病毒，而Cryptosporidium其他种中不存在[6]。因此可以把CSpV的分子特征和抗原特性作为检测C.hominis和C.parvum卵囊的一个依据。该病毒衣壳蛋白基因S-dsRNA可作为对人具有感染性的隐孢子虫(C.hominis和C.parvum)与其它种类隐孢子虫鉴别的一个分子标记和含病毒虫株的分离和鉴定的依据[7]。本研究利用在E.coliBL21(DE3)表达的S-dsRNA蛋白作为抗原，建立了检测人的隐孢子虫感染的间接ELISA方法。

1 材料和方法

1.1 菌株、血清及实验动物 CSpV衣壳蛋白表达菌pET-28a(+)-S、鼠抗安氏隐孢子虫(C.andersoni)阳性血清、鼠抗弓形虫(T.gondii)阳性血清、鼠抗蓝氏贾第虫(G.lamblia)阳性血清、鼠抗鸡柔嫩艾美尔球虫(E.tenella)阳性血清均由本室制备。体质量18 g～20 g的6周龄～8周龄雌性BALB/c小鼠6只，购自长春生物制品所。

1.2 主要试剂 Ni-NTA亲和层析柱为美国GE公司产品；……