IgA肾病患者AGT M235T基因多态性分析

黄海东,李新娟,王立瑞,蒋更如,朱 淳

(上海交通大学医学院附属新华医院肾脏内科,上海,200092)

IgA肾病(IgAN)是临床最为常见的原发性肾小球疾病[1],病理上表现为免疫球蛋白A(IgA)为主的免疫球蛋白在肾小球系膜区的沉积,但其临床表现多样,预后相差悬殊,高血压、大量蛋白尿、较重的病理损害是影响其预后的危险因子[2]。近年来,越来越多的研究表明遗传因素在IgAN的发病机制中起重要作用。肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)可以调节机体的水、钠平衡,在血压调控、肾损伤及慢性肾功能不全进展中起重要作用。研究发现IgAN患者血管紧张素Ⅱ活性升高,应用血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素受体抑制剂(ARB)治疗可以减少蛋白尿,延缓肾功能进展,证实RAAS系统在IgAN中的作用。血管紧张素原(AGT)是RAAS的重要组成部分,AGT基因M235T的多态性影响RAAS的活性。本研究旨在对本院I-gAN患者的AGT M235T基因多态性进行分析,以探讨该多态性与IgAN患者的临床表现和病理特点的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2009年1月～2011年3月上海市新华医院肾脏内科IgAN患者共105例。所有患者经肾穿刺病理活检证实。排除过敏性紫癜性肾炎、系统性红斑狼疮、慢性肝病等继发性肾脏IgA沉积患者。其中男 45例,女60例,年龄14～73岁,平均(43.2±12.9)岁。另选择120例正常体检者作为对照组。

1.2 方法

基因型检测:抽取空腹静脉血5 mL,提取外周血基因组DNA。采用聚合链式反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测AGT M235T基因多态性[4]。引物序列:引物1:5′-CCG TTT GTG CAG GGC CTG GCT TCT T-3′;引物 2:5′-CAG GGT GCT GTC CAC ACT GGA CCC C-3′。对 IgAN 患者的年龄 、性别 、血压、血清肌酐、24 h尿蛋白定量、初始的估算肾小球滤过率(eGFR)[3]、肾穿刺活检的病理进行观察和检测。计算出IgAN患者AGT各基因亚型的频率,经Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验。

2 结 果

2.1 AGT M235T基因型分析

AGT基因第2外显子编码产物第235号氨基酸由蛋氨酸(M)变异为苏氨酸(T),即核苷酸704处碱基T被C代替,丢失了TthⅢ限制性酶切位点:GACNNNGTC,故酶切产物电泳后可出现3种情况:T T纯合型(有酶切位点):141 bp,24 bp;MM纯合型(无酶切位点):165 bp;MT杂合型:165 bp,141 bp,24 bp。见图1。

图1 ACT M235T基因型

2.2 IgAN患者和正常对照AGT M235T基因频率的比较

本院的105例IgAN患者中,MM基因型、MT基因型、TT基因型的患者分别占2.9%、20.0%、77.1%,120例健康体检者中,MM基因型、MT基因型、TT基因型的人数分别占0.8%、31.7%、67.5%,2组人群的基因型分布无统计学差异(P>0.05)。见表1。

表1 IgA肾病患者和正常对照组AGT M235T基因频率的比较[n(%)]

2.3 AGT M235T多态性与IgAN临床特征的比较

IgAN患者的发病年龄、性别、平均动脉压、24 h尿蛋白定量、血清肌酐值、初始的eGFR值在AGT M 235T基因型之间无统计学差异(P>0.05)。见表2。

表2 AGT M235T基因多态性与IgAN患者主要临床特征的关系( x±s)

2.4 AGT M235T多态性与IgAN病理特征的比较

在AGT M235T 基因MM 、MT、TT 3种基因亚型的患者中,有肾小球硬化的患者所占的比例之间无统计学差异(P>0.05)。有球性硬化或节段性硬化的患者所占的比例在3种基因亚型间也无统计学差异。在3种基因亚型的患者间,肾小球硬化程度(球性硬化+节段性硬化比例)无统计学差异。有肾间质纤维化、肾小管萎缩、肾血管病变的患者在3种基因亚型间的分布同样无统计学差异(P>0.05)。见表3。

表3 AGT M235T基因多态性与IgAN患者病理情况的关系[n(%)]

3 讨 论

IgA肾病的发病率有明显的地区和种族差异,亚洲是IgA肾病的高发地区。在我国、日本和新加坡,IgA肾病占肾活检诊断原发性肾小球肾炎的30%～50%,在印度其发病率仅为4%～7%,泰国为9.2%[5]。黄种人是IgA肾病的高发人群,而黑人极少见IgA肾病,同时IgA肾病还有家族聚集现象,这些提示该病可能与遗传因素密切相关。鉴于IgA肾病发病的地区和种族差异,本文就上海人群的IgA肾病患者做一研究。

IgA肾病的发病机制目前尚未完全清楚,然而越来越多的研究证据表明,遗传因素对IgA肾病的发病起着重要的作用,其机制可能是一种多基因、多因素参与的复杂的遗传性疾病。研究与IgA肾病发生、发展有关的基因变异是当前的一个热点,其中RAAS的基因变异也与IgA肾病密切相关。RAAS在肾脏疾病的发生、发展中发挥了重要影响[6]。AGT是RAAS的重要组成部分。AGT是RAAS中唯一的限速反应初始底物,血浆中AGT水平的高低直接影响RAS的强弱。AGT基因M235T多态性影响RAAS的活性,有报道TT型人群血浆ACT水平明显高于MM型[7]。近年来虽然研究结论并不一致,但大多数研究不支持AGT M235T基因多态性与IgA肾病的发生有关[4,8-9],即AGT基因并非IgA肾病的易感基因。本研究通过比较105例IgA肾病患者与120例正常人群的AGT M235T各基因亚型的分布频率,发现其差异并无统计学意义,与以往研究结果一致,再次验证了AGT M235T的基因多态性与IgA肾病的发病无关。

研究表明,大量蛋白尿、发病时已有血肌酐升高、持续性高血压、发病时年龄较大及肾脏病理损害严重均是IgA肾病患者预后不良的重要指标[10]。但在本研究中,性别、发病年龄、血压、蛋白尿、发病时学肌酐、GFR等临床指标,AGT各基因型均无明显差异,提示AGT基因型在IgA肾病发展中可能不起主要作用。肾小球硬化、肾间质纤维化、肾小管萎缩和肾血管病变是IgA患者预后不良的重要病理指标,但本研究发现AGT各基因型的病理表现并无差别,再次验证AGT基因型在IgA肾病法中不起主要作用。提示IgA肾病是一个受多基因、多因素影响的疾病,发病过程涉及多个环节,需要进一步研究不同多态位点的交互作用,才能揭示遗传多态性在IgA肾病发生发展中的作用。

综上所述,IgA肾病是一个多基因、多因素影响的疾病,本研究需要进一步加大样本量,并随访患者的病情进展,才能正确判断AGT基因多态性和IgA肾病的关系。

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