糖尿病对骨髓干细胞血管新生潜能的影响

刘泽林，陈 燕

（1.南昌大学第四附属医院内分泌科，南昌330003；2.武警江西总队医院内科，南昌330001）

近年的研究发现骨髓干细胞具有诱发血管新生的潜能，并且能用于改善缺血性脏器的血流和功能［1］。基于这一特性，国内外已广泛开展了利用病人自体的骨髓干细胞来治疗冠心病及其他缺血性心血管疾病的临床试验［2］。尽管很多临床试验报告了这一新治疗技术是安全的，但有些患者的治疗效果并不理想［3］。其原因可能与患者自体的骨髓干细胞的质量及缺血性脏器的局部状况有关。有研究资料显示，糖尿病等可能导致骨髓干细胞受损，并影响其诱发血管新生的潜能［4－5］。本研究的目的旨在调查糖尿病对骨髓干细胞产生血管生长因子（VEGF）的能力以及骨髓干细胞向内皮细胞分化能力的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1）实验动物：雌性18周龄的糖尿病肥胖大鼠（实验组）和非糖尿病健康大鼠（对照组）大鼠各20只（均由日本山口大学医学部试验动物中心提供）。

2）主要试剂：VEGF测定试剂、RPMI1640培养基等试剂均由日本山口大学医学部试验中心提供。

1.2 方法

1.2.1 骨髓干细胞的采集及培养

取出大腿骨并把骨髓细胞单离浮游于PBS溶液中。应用比重离心法从骨髓细胞中分离纯化骨髓单核细胞。把新鲜分离采集的骨髓单核细胞浮游于RPMI 1640培养基（3×106cells·mL－1）中，并添加15%胎儿牛血清（Gibco）、100U·mL－1青霉素和100μg·mL－1链霉素。细胞培养于37℃含5%CO2湿化培养箱内。

1.2.2 细胞生存的测定

在细胞培养第3、7天后取出培养细胞并用0.4% 台盼蓝溶液染色后测出生存的细胞数。……