多重PCR在沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染诊断中的应用

李咏梅

(淄博市临淄区人民医院检验科,山东淄博 255400）

现在全球最常见的公共卫生问题中,食源性疾病排在首位,其主要原因是食品污染,主要病原菌有沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌[1]。因此,为了快速的、有效地检测出病原菌,减少或预防食源性疾病的发生,临床工作者和检疫部门研究出效率更高的多重PCR检测法。多重PCR检测法是一种更优于PCR的特殊技术,在同一体系中可以加入多种引物,并对多个待检基因进行扩增,检测多种病原体也只需一次PCR反应,因此,在鉴别诊断混合感染时多重PCR技术具有更加方便、快捷、高效率的优势[2]。本文中,我们就多重PCR在沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染诊断中的应用效果进行观察,并将结果总结报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

将2009年3月-2010年3月来我院进行诊治的100例感染患者中采集的的沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作为研究对象,将其分作两份。将所有菌株接种在营养琼脂斜面,在37摄氏度环境中培养18 h,进行3次转接后备用。

1.2 方法

将培养好的备用菌,即沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌各1 ml、以密度为10 cfu/ml同时分别加入制备好的培养液中,在37摄氏度环境中,150 r/min的速度进行18 h的振荡培养。选用平板计数法,将培养后的增菌液1ml以10倍梯度用无菌生理盐水进行稀释,用Baird—Parker平板和WS平板计数。多重 PCR检验方法:取 1.0 ml增菌液,以14 000 r/min的速度离心5 min,在沉淀中加入1.0 mLTE清洗30 s,继续离心5 min,当超纯水中溶解后,进行15 min沸水浴,然后快速给予5 min冰浴,以12 000 r/min的速度离心,为时3 min,取上清10 μ l作为PCR反应模板。……