阪崎肠杆菌实时荧光双重TaqMan PCR快速检测体系的建立＊

孟 双，李 娟，王 艳，白雪梅，叶长芸

阪崎肠杆菌实时荧光双重TaqMan PCR快速检测体系的建立＊

孟 双，李 娟，王 艳，白雪梅，叶长芸

目的 建立针对阪崎肠杆菌的高灵敏、高特异的实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应（PCR）快速检测体系。方法 根据阪崎肠杆菌基因组16SrRNA～23SrRNA的内部转录间隔区（ITS）基因和外膜蛋白A（OmpA）基因的特异性序列设计引物及TaqMan探针，利用高通量实时荧光PCR检测平台探讨该检测体系的灵敏度；用50种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌评价该检测体系的特异性。结果 实时荧光双重TaqMan PCR快速检测体系对阪崎肠杆菌重组质粒的检测灵敏度为1×102拷贝/反应体系；对阪崎肠杆菌基因组的检测灵敏度为4×10－1pg/反应体系；该检测体系在检测50种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现特异性扩增，整个反应在2h内完成。结论 本研究建立的实时荧光双重TaqMan PCR检测体系可作为阪崎肠杆菌灵敏、特异、快速的检测方法，并同时检测阪崎肠杆菌的致病力。

阪崎肠杆菌；实时荧光TaqMan PCR；外膜蛋白A；内部转录间隔区

阪崎肠杆菌是一种革兰阴性、有周生鞭毛、能运动、兼性厌氧的无芽孢杆菌，起初被认为是阴沟肠杆菌的生物变型菌。后来Farmer［1］通过DNA杂交实验以及菌株的生化特性等特征将其重新命名为阪崎肠杆菌，并划分为克罗诺杆菌属（Cronobacterspp）。

作为一种重要的条件致病菌，阪崎肠杆菌感染的大多数病例都是婴儿，特别是早产儿、出生体重偏低等身体状况较差的新生儿。感染主要引起脑膜炎、菌血症和坏死性小肠结肠炎［2］。……