Spoligotyping结合多位点PCR用于牛分枝杆菌卡介苗的快速鉴定*

张媛媛 ,黄明翔 ,赵秀芹,张丽水,刘志广,万康林

2.福建福州肺科医院 福州350001

卡介苗(Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin,M.bovis BCG)是上世纪初期法国科学家Calmette和Guérin从牛乳中分离出的牛分枝杆菌(M ycobacterium bovis,M.bovis),经13年 230代的传代培养制成的减毒活疫苗。我国从上世纪50年代开始新生儿接种卡介苗工作,是我国儿童计划免疫中历史最悠久、接种人数最多的疫苗之一。公认地,卡介苗可以有效地降低儿童原发性结核、结核性脑膜炎、粟粒型结核的发生,但是自2007年以来,我国有多篇文献报道由于疫苗误种或不规范接种导致的儿童卡介苗病[1-3],甚至导致儿童死亡[4]。但是,这些病例全部是由临床症状和流行病学资料诊断的临床卡介苗病例,缺乏实验室证据支持。本研究采用传统的细菌学菌种鉴定技术和两种分子生物学技术对从临床诊断的一例儿童全身播散性BCG病病例的分离的菌株进行了鉴定,现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 结核分枝杆菌H 37Rv,牛分枝杆菌93006,田鼠分枝杆菌ATCC19422,非洲分枝杆菌ATCC25420,鸟分枝杆菌ATCC25291,胞内分枝杆菌 ATCC13950,耻垢分枝杆菌ATCC19420,为本实验室保藏株;临床分离菌株和注射用卡介苗均由福建省福州肺科医院检验科提供。

1.2 临床病例及其流行病学资料[4]由福建福州肺科医院医生根据患儿临床症状、相关实验室检查,包括:淋巴穿刺液细菌培养,涂片显微镜检查以及血常规检测和影像学检查等,做出疾病临床诊断,流行病学资料通过询问患儿家长收集。

1.3 鉴别培养基培养与药敏试验 以无菌手续研磨……