α－乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸乙酯水解酶产生菌发酵培养基的响应面优化

袁 帅，王 普，何军邀

（浙江工业大学 药学院，浙江 杭州 310032）

α－乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸乙酯水解酶产生菌发酵培养基的响应面优化

袁 帅，王 普，何军邀

（浙江工业大学 药学院，浙江 杭州 310032）

对耐酪氨酸冢村氏菌（Tsukamurellatyrosinosolvens）E105菌株生物拆分外消旋体α－乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸乙酯制备左乙拉西坦关键手性中间体（S）-α－乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸的发酵培养基进行优化，以提高其产酶活力.首先考察了碳源和氮源对菌种产酶活力的影响，并通过Plackett－Burman实验得出影响该菌株产水解酶的最主要因素为酵母粉质量浓度和初始pH值.继而采用中心组合实验并结合响应面分析优化发酵培养基组成，确定了最佳的酵母粉质量浓度为12.1 g／L，最佳的初始pH值为7.06.在优化的条件下酶活力可达1 024.6 U／mL，较优化前提高了67%，表明采用响应面法优化发酵培养基组成是提高该菌株产酶活力的有效途径之一.

α－乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸乙酯；冢村氏菌；水解酶；响应面优化

左乙拉西坦（Levetiracetam，LEV，商品名Keppra®）是比利时联合化学公司（UCB）研发的新一代抗癫痫药物（AEDs）［1］，化学名为（S）-α－乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酰胺［2］，为具有吡咯烷酮结构的促智药［3］.由于其独特的抗癫痫机制，较理想的药代动力学、高效安全的临床效果，不与其他AEDs发生作用以及较少的副作用等特点［4－7］，1999年FDA正式批准将其用于16岁以上成人部分性癫痫发作的添加治疗，2005年又将适应症扩大到4岁以上儿童［8－9］.目前，LEV已在欧美广泛使用［10］，2006年获准在我国上市.目前报道的LEV制备方法主要采用化学合成，包括手性源法，手性拆……