四种梅毒血清检测方法比较分析

潘兰

梅毒(syphilis)是由苍白螺旋体（Treponema pallidum,TP）(又称梅毒螺旋体)引起的一种性传播疾病，可侵犯皮肤黏膜及神经、心血管、骨骼等组织器官，引起慢性病变。近年来，我国梅毒的患病率呈逐渐上升的趋势，因此，对梅毒进行快速、敏感、全面的检测就显得尤为重要。梅毒血清学试验是目前国内外诊断梅毒的主要实验室检查方法。应用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、胶体金快速检测试验(SYP)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)四种血清学检测方法，对梅毒患者的标本进行检测，并对检测结果及各种方法的优缺点进行比较及应用探讨，结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

2009年3月至2010年2月对全市进行婚检的人员所采集标本6215份，医院确诊的梅毒患者标本75份。其中一期梅毒52例，二期梅毒21例，晚期梅毒2例，所有患者的梅毒诊断均符合标准[1]。

1.2 试剂与仪器

TRUST试剂盒由上海荣盛公司提供，SYP试剂盒由杭州艾康生物技术有限公司提供，TP-ELISA(IgG/IgM)试剂盒由厦门新创科技有限公司提供，TPPA试剂盒由日本富士瑞必欧株式会社提供。CliniBio酶标仪和AW1全自动洗板机，梅毒振荡仪。

1.3 方法

用甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）做非特异性抗体半定量检测，用胶体金快速检测试验（SYP）、酶联免疫吸附试验(ELISA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）做特异性抗体定性检测，TRUST、SYP、ELISA、TPPA四种方法均严格按试剂盒操作说明书进行操作，并在有效期内使用。

1.4 统计学方法用x2检验

2 结果

2.1 四种方法检出情况

在6215份标本中，经TPPA确认后检测出75份阳性标本，其阳性检出率为1.21%(75/6215)，见表1。TRUST梅毒阳性检出率为0.77%(48/6215)，SYP梅毒阳性检出率为0.96%(60/6215)，ELISA梅毒阳性检出率为1.19%(74/6215)。其中TRUST敏感性为57.3%，特异性99.91%，SYP敏感性76%，特异性99.95%，ELISA敏感性为97.3%，特异性99.98%。阳性检出率：ELISA＞SYP＞TRUST，敏感性：ELISA＞SYP＞TRUST，特异性：ELISA＞SYP＞TRUST。

表1 三种检测方法敏感性、特异性比较

TRUST特异性=[真阴性/（真阴性+假阳性）]×100%=[6135/（6135+5）]×100%=99.91%

SYP特异性=[真阴性/（真阴性+假阳性）]×100%=[6137/（6137+3）]×100%=99.95%

ELISA特异性=[真阴性/（真阴性+假阳性）]×100%=[6139/（6139+1）]×100%=99.98%

2.2 四种方法检测结果比较

由表2可见，ELISA法与TPPA法检测结果无统计学差异（P＞0.05），TRUST法、SYP法与TPPA法检测结果差异有统计学意义（P＜0.01）。

表2 四种方法检测6215份血清标本的结果比较

表3 四种血清学检测方法检测梅毒的诊断意义

3 讨论

TRUST采用（VDRL）重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成，在白色卡片上进行实验，以检测血清或血浆中的反应素[2]。TRUST试验检查的是人体内的反应素，是一种非特异性类脂质抗体，人体在某些生理状态，如怀孕时，TRUST可以出现假阳性；患有隐性传染病，如风疹、水痘、病毒性肝炎、上呼吸道感染、肺结核、肺炎、亚急性细菌性心内膜炎等疾病时，TRUST也可以呈假阳性；许多慢性病，如类风湿性关节炎、SLE、风湿性心脏病、肝硬化、干燥综合征、慢性胃炎和海洛因成瘾等，TRUST同样可以呈假阳性[3]。该方法操作简便，试剂价格便宜、反应快，不需要特殊仪器设备，方便测定梅毒抗体滴度，其滴度变化与梅毒治疗情况呈正相关，该法最适用于临床医生对梅毒性疾病的疗效观察、随防。

SYP采用高特异性抗原抗体反应及免疫层析分析技术来定性检测血清/血浆中是否含有梅毒特异性抗体的试验方法[4]。SYP是应用现代生物工程技术制备的高度纯化的单克隆梅毒螺旋体的基因工程抗原，能够高度选择地找寻与之相结合的抗体的原理，因而具有快捷(反应5～10min即可出结果)、简便的特点，SYP的检测过程中可最大限度地避免标本处理、温度、湿度、pH值等对结果的影响，并且该法一次加样，不需任何仪器设备，易于操作，既可用于批量检测，也可用于少量标本的检测。除了和传统的确诊实验一样对梅毒初染阶段和先天梅毒敏感性较低之外，对其它阶段的患者血清具有较高的敏感性和特异性。

TP－ELISA是利用基因重组工程合成梅毒特异性抗原包被在微孔滴定板上，用双抗原夹心法检测血清中的梅毒特异性抗体的一种较新的梅毒血清学诊断方法。文献[3]报道：双抗原夹心法ELISA检测梅毒螺旋体敏感性高，结果可与TPPA试验媲美，且假阳性和假阴性不易出现，故特异性也较好。而且由于机体不会产生太多的抗体，所以不会有“钩状效应”的出现，也不会因此而产生假阴性。此方法操作简便，一次可完成多份标本的检测，其试验结果由仪器分析，客观而准确，易于读取、保存。可以自动化、标准化、大批量同时检测，工作中对ELISA的室内质量控制也有更多的经验。因此，TP-ELISA法是目前梅毒筛选、早期诊断、确认的最好方法之一。但TP—ELISA法主要缺点为该法检测的是梅毒IgM和IgG的混合抗体，梅毒IgG抗体治愈后相当长时间内仍然存在较高的阳性率，甚至终身[5]。因此，TP-ELISA单独阳性只能说明正在感染或曾经感染过，不能判断梅毒疾病活动与否，或处于恢复期，因此不能作为疗效监测手段[6]。

TPPA试验是将特异性梅毒螺旋体抗原包被在明胶颗粒上，省略了吸收剂，不受生物学因素影响，与血清中的特异性抗体结合后，出现肉眼可见的凝集反应的检测方法[7]。TPPA法具有特异性强、敏感性高，血清、血浆皆可用于检测的特点，但反应时间较长，最少需要1.5h，而且价格较昂贵，不适于大批量的检测。

比较本次实验结果：①TRUST法灵敏度和特异性均低于SYP、ELISA，存在一定的假阳性率和假阴性率。因此对早期梅毒的辅助诊断能力差，不适合用于早期梅毒的辅助诊断。②SYP法是一种快速体外诊断技术，与TRUST、TP-ELISA法相比，此法简便、快捷、低成本，可对临床上疑诊梅毒的患者进行筛选。③ELISA是一种基于基因工程的特异性检测技术[8]，灵敏度和特异性均高于TRUST、SYP，且与TPPA鉴定试验的吻合度较高，对梅毒的早期辅助诊断较好。因此，ELISA阳性只说明正在感染或曾经感染过，不能判断梅毒疾病活动与否，所以不能作为疗效监测手段[10]。

本组75例阳性血清标本检测结果可表明：TRUST(-)SYP(-)ELISA(-)TPPA(-)提示排除梅毒或初期感染潜伏期；TRUST(+)SYP(+)ELISA(-)TPPA(-)提示假阳性或初期感染期；TRUST(+)SYP(+)ELISA(+)TPPA(+)提示梅毒感染期；TRUST(-)SYP(+)ELISA(+)TPPA(+)提示晚期梅毒或梅毒既往感染[9]。综上，我们认为目前对临床各期梅毒应根据临床不同的目的用SYP法进行筛选，并结合TRUST进行诊断，仍有疑问者，再用ELISA或TPPA进行确诊，将是一般医疗机构较为理想的血清学实验组合。既能有较高的敏感性和特异性，又能很好地进行疗效观察，提高临床实验室对梅毒性疾病的诊断率，最大限度地避免误诊和漏诊。

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