同病异证H22肝癌小鼠甲状腺机能及激素合成关键基因表达特征*

卢文丽 方肇勤 潘志强 梁 超 管冬元 吴中华 刘小美

上海中医药大学基础医学院 (上海，201203)

原发性肝癌是我国高发的恶性肿瘤之一，而中医药在肝癌的防治中，在改善患者生存质量、延长带瘤生存期等方面具有一定的优势。中医药防治肝癌的特点是辨证论治，即依据“同病异证”实施“同病异治”。揭示同病异证发生的物质基础是学术界长期以来一直关心的问题，也是探索和发展肝癌辨证论治方法的重要前提。

鉴于学术界以往研究证实中医常见证候与神经-内分泌系统有关［1，2］，同时该系统中甲状腺作为机体重要的内分泌腺与中医证候密切相关，而以往国内外肝癌防治研究中尚未涉及该层面，因此我们采用小鼠标准化、计量化检测方法，筛选出邪盛衰度不同的荷瘤小鼠，同时兼顾气虚证，检测其血清T3、T4激素水平，同步观察甲状腺激素合成密切相关的Tshr、Tpo、Tg、Nis等4个基因转录水平，有利于揭示肿瘤邪毒盛衰程度与甲状腺机能及其基因表达调控的关系。

1 材料与方法

1.1 动物与细胞株 昆明种小鼠，雄性，250只，体重22±2g，购自上海斯莱克实验动物有限公司，动物生产许可证号为SCXK(沪)2007-0005，动物使用许可证号为SYXK(沪)2009-0069。小鼠H22肝癌细胞株购自上海中科院药物所。

1.2 主要试剂 小鼠总三碘甲状腺原氨酸 (T3)和小鼠总甲状腺素 (T4)ELISA试剂盒购自美国Calbiotech公司。Takara SYBR Premix Ex Taq购自大连宝生物工程有限公司，引物由上海英骏生物技术有限公司合成，以GAPDH作为内参：基因Tshr上游5'-GACAACGAGGACATGGTGTG-3'，下游5'-GGCTGGTTAGCAGAATGAGC-3'，产物长度154bp;基因Tpo上游5'-TGACTTCCAGGAGCACACAG-3'， 下 游 5'-CAGGAGGCCTCTCACTATCG-3'，产物……