小新月菱形藻固定化培养初步研究

陈书秀 王虎

（1 山东东方海洋集团有限公司 山东烟台 264003 2 烟台海融生物技术有限公司 山东烟台 265600）

小新月菱形藻(Nitzschia closterium f.minutissima)俗称“小硅藻”，是我国较早培养和应用的单胞藻饵料，其个体小，繁殖快，脂肪含量高，环境适应能力强，可作为理想的保健食品，在海水养殖业中占有重要地位。目前小新月菱形藻主要采用继代法来进行保存，该方法由于数次接种容易导致藻种污染或者藻种的遗传漂变，近几年固定化藻类的研究正在迅速发展，在能源生产、污水处理和种质保存等领域有很大的应用前景，尤其是在保重和次级代谢产物的生产方面，引人瞩目[1]。本文研究了固定化条件对小新月菱形藻生长的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料：小新月菱形藻(Nitzschia closterium f.minutissima)

1.2 试验步骤：

1.2.1 载体的制备：称取海藻酸钠3g，在开水浴中慢慢搅动(约1h)溶人100 mL蒸馏水中，配成3%(W/V)的凝胶溶液，加人2gNaC1，煮沸消毒备用。以凝胶溶液与鲜藻体积比为4：1的比例接种藻种，充分搅匀后制成胶～藻混悬液，用注射器吸取混悬液，滴入CaC12溶液中，约30min后形成固化的海藻酸钙胶珠。用消毒海水洗涤3遍后，按各试验的要求培养于100mL的三角烧瓶(50mLf/2培养液)中。

1.2.2 实验设计

1.2.2.1 胶珠直径试验：在实验室无菌条件下，将藻细胞与3%海藻酸钠以体积比1:4混合，在2%CaC12溶液中用不同型号的注射器针头4.5#、6#、7#分别制备不同直径的胶珠。藻接种密度为1.74×105cells/mL，胶珠粒数为200粒，培养液体积为50mL。每组设3个平行。

1.2.2.2 接种密度试验：在实验室无菌条件下，分别将不同密度的藻细胞与海藻酸钠混合，在2%CaC12溶液中利用6#针头制备成胶珠，粒数为200个，培养液体积为50mL。……