rhIL－17A对人皮肤角质形成细胞和成纤维细胞活性和凋亡的影响

徐 霞， 赖 宽， 郭 庆， 曾凡钦△

(1中山大学孙逸仙纪念医院皮肤科，广东广州510120;2南方医科大学南方医院皮肤科，广东广州510515)

系统性硬皮病是一种以皮肤及内脏器官纤维化或硬化、最后发生萎缩为特点的疾病。系统性硬皮病目前尚无特效治疗方法，患者常死于肺纤维化、肺部感染、肾功能衰竭等。系统性硬皮病的发病机制尚不明确［1］。已有研究报道系统性硬皮病皮肤损害及内脏组织中有白细胞介素17(interleukin－17，IL－17)浸润［2］，但 IL－17在系统性硬皮病的发病中具体作用仍不是很清楚。本研究检测了重组人白细胞介素17A(recombinant human interleukin－17A，rhIL－17A)对体外培养人角质形成细胞和成纤维细胞生物学特性的作用，旨在探讨IL－17在系统性硬皮病皮肤损害发病中的作用。

材料和方法

1 材料

角质形成细胞培养液(K－SFM)、DMEM培养基、胎牛血清及0.02%EDTA－0.25%胰蛋白酶购自Gibco;DispaseⅡ购自Sigma;鼠抗人广谱角蛋白单克隆抗体和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗鼠IgG(H+L)、小鼠抗人波形蛋白单克隆抗体、ABC显色试剂盒和生物素化马抗小鼠Ⅱ抗购自博士德公司;CCK－8购自日本同仁化学研究所;rhIL－17A购自R＆D;兔抗人NF－κB/p65单克隆抗体、兔抗人 IκBα单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记Ⅱ抗购自Cell Signaling;IL－6和TGF－β1的ELISA试剂盒购自华美生物公司。

2 方法

2.1 人角质形成细胞的培养及鉴定

①人角质形成细胞的培养 取环切术后包皮，将所取标本用含1×105U/L氨苄青霉素和100 mg/L链霉素的PBS浸泡15 min。PBS漂洗3次后，用眼科剪去除多余的皮下组织，将皮肤剪成8 mm×3 mm×4 mm小块，再用PBS洗3次，移入1.6×103U/L dispaseⅡ，4℃消化过夜后剥离表皮。将分离的表皮置于0.02%EDTA－0.25%胰蛋白酶中，37℃消化10 min;用含10%FBS的DMEM培……