豚鼠COPD模型MMP-9和TIMP-1的表达及吸入糖皮质激素对其表达的影响

段珊 邓立普

慢性阻塞性肺疾病是以“不完全可逆的气流受限”为特征的慢性气道炎症性疾病。目前认为基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制物(TIMPs)，在COPD发生发展中起重要作用。MMP-9属于MMPs家族中明胶酶类，是降解Ⅳ型胶原的最主要成员之一。而TIMP-1是MMP-9重要的生理性抑制剂。本试验拟检测COPD模型MMP-9和TIMP-1的表达，通过布地奈德干预豚鼠COPD模型的研究，了解其对肺组织MMP-9、TIMP-1表达的影响。

1 材料与方法

1.1 模型制备 健康豚鼠，雌雄对半，体重(200±20)g，共18只，随机分成:(1)COPD模型组12只，分为2小组，每小组各6只，其中一组无药物干预和布地奈德组;(2)正常对照组6只。将三组模型组豚鼠分别放入三个90×60×90 cm(容积486L)自制熏箱内，箱侧壁留有直径约2 cm的通风孔。在通风口处放一小型电扇。豚鼠暴露于烟雾中进行被动吸烟，2次/d，每次10支香烟，持续1～1.5 h，两次被动吸烟间隔4 h，每周被动吸烟5 d，连续3个月。

1.2 药物干预 将布地奈德组豚鼠放入20×30×40 cm塑料箱内，箱侧壁留有直径约1.5 cm的通风孔。布地奈德雾化液通过超声雾化器(由南华大学附属南华医院提供)导入箱内。2次/d，一次加入生理盐水20 ml+布地奈德1 ml(0.5 mg/ml)，雾化时间约30 min。

1.3 病理标本采集及染色 豚鼠断头放血处死，打开胸腔取右下肺及相连的支气管，用生理盐水冲洗肺表面，然后浸入10%福尔马林中固定24 h，取右下肺叶最大横径约3 mm厚组织及支气管分叉上0.5 cm气管横、纵截面标本，脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片。行HE染色和免疫组化。

1.4 免疫组化染色 参照试剂盒推荐链酶卵白素-过氧化物酶免疫组化法，应用SP9003免疫组化试剂盒(中山公司)和DAB显色法。……