急性坏死性胰腺炎大鼠肺组织水通道蛋白-1的动态变化及其意义

王锋 黄鹤光 陆逢春 陈燕昌

急性坏死性胰腺炎大鼠肺组织水通道蛋白-1的动态变化及其意义

王锋 黄鹤光 陆逢春 陈燕昌

重症急性胰腺炎(SAP)早期常并发多器官衰竭，其中以呼吸功能衰竭最多见[1]。SAP早期一旦发生急性肺损伤(ALI)，出现肺水肿、胸水，意味着患者预后很差[2-3]。本研究观察水通道蛋白1 (AQP1)在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肺组织中的动态变化，探讨AQP1在肺水肿形成中的作用。

一、材料和方法

1．实验动物与分组：健康清洁级成年雄性和雌性SD大鼠80只，体重200～230 g，购自福建医科大学实验动物中心。适应性饲养1周后按完全随机法随机分成ANP组和假手术对照组，各40只。参考Goldenberg等[4]方法，采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠0.1 ml/100 g体重制备ANP模型。对照组仅翻动胰腺后关腹。术后3、6、12、24 h分批处死动物，测胸腔积液量，下腔静脉抽血及取肺、胰腺组织。

2．血清淀粉酶测定：应用全自动生化分析仪(LX20，Beckman, USA)检测。

3．肺系数测定：取右肺称湿重，然后置70℃烤箱中烤2 d至恒重，称其干重。肺系数为肺湿、干重比值(W/D)。

4．肺及胰腺组织学检测：取左上肺及完整胰腺，置10%福马林液固定，常规石蜡包埋、切片、HE染色，由两位病理专业医师采用双盲法读片，并参照Thome等[5]、Schmidt等[6]标准分别给肺及胰腺病理改变评分。

5．AQP1蛋白表达检测：采用免疫荧光组织化学法和蛋白质印迹法检测。取左下肺置4%多聚甲醛+0.3%戊二醛固定液固定，常规行免疫荧光组织化学法。兔抗大鼠AQP1的IgG购自Santa cruz biotechnology公司，羊抗兔IgG-FITC购自Abcam公司。另取新鲜的肺组织，用细胞裂解液制备组织匀浆，常规行蛋白质印迹法，最后ECL 发光。……