人乳头瘤病毒与胰腺癌关系的初步探讨

刘冬梅 陈少夫

人乳头瘤病毒与胰腺癌关系的初步探讨

刘冬梅 陈少夫

早在20世纪90年代初期就已证实，人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染与宫颈癌有关[1]，现又证实HPV还与肛管癌、阴茎癌、口腔咽喉癌、膀胱癌、肺癌、食管癌、结直肠癌等多种肿瘤相关[2-5]，但与胰腺癌的关系尚未见报道。因此，本文研究HPV感染与胰腺癌的关系。

一、材料与方法

1．组织标本：收集2007年1月至2009年12月中国医科大学附属盛京医院肝胆胰切除的经病理证实的39例胰腺癌石蜡包埋标本。患者术前无明确的HPV相关疾病感染史，其中男22例，女17例，年龄39～73岁，平均57岁。以已证实存在HPV感染的临床宫颈拭子组织作为阳性对照。

2．MY/GP巢式PCR扩增HPV DNA：取石蜡组织切片，脱蜡至水后，室温下放置10 min，应用基因组DNA提取试剂盒(潮州凯普生物化学有限公司)提取组织DNA，按说明书操作。参考文献[6-7]设计针对HPV相对保守的L1 区的外引物MY09/11，序列5′-CGTCCMARRGGAWACTGATC-3′，5′-GCMCAGGGWCTATAAYAATGG-3′，扩增片段450 bp；内引物GP5+/GP6+，序列5′-TTTGTTACTGTGGTAGATACYAC-3′，5′-GAAAAATAAACTGTAAATCATATTC-3′，扩增片段140 bp。序列中的M=A/C, R=A/G, W=A/T, Y=C/T。以原癌基因c-kit第17号外显子为内参照，序列5′-TACAAGTTAAAATGAATTTAAATGGT-3′，5′-AAGTTGAAACTAAAAATCCTTTGC-3′，扩增片段228 bp。引物均由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。应用内参照引物行PCR扩增。PCR条件：95℃ 9 min，95℃ 20 s，55℃ 30 s，72℃ 30 s，40个循环，最后72℃ 5 min。参考文献[8-9]行巢式PCR扩增HPV DNA。第一次应用MY09/11引物扩增，PCR条件：96℃ 5 min，96℃ 45 s，50℃ 45 s，72℃ 60 s，30个循环，最后72℃ 10 min。再以扩增的DNA片段为模板，GP5+/GP6+为引物，行第二次扩增，PCR条件：94℃ 5 min，94℃ 30 s，40℃ 45 sec，72℃ 45 s，40个循环，最后72℃ 10 min。每批次PCR反应均包括阳性对照和阴性对照(蒸馏水)，扩增产物均行1.5%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像分析系统(Tanon GIS-2020)观察结果并摄片。

二、结果

1．人原癌基因的检测：39例胰腺癌组织均扩增出c-kit基因片段(图1)，证实全部组织标本DNA提取成功。……