蜂毒素对人肝癌BEL-7402细胞增殖和VEGF、bFGF表达的影响

宋长城，吕 祥，程彬彬，李 柏，凌昌全

血管新生与肿瘤的形成和转移关系密切［1］。在肿瘤血管生成过程中，肿瘤细胞与血管内皮细胞相互依赖生存［2］。血管内皮细胞产生的各种生长因子对肿瘤生长具有旁分泌作用。同时，肿瘤细胞又可分泌血管内皮细胞生存和增殖所需要的有丝分裂原和动力原。肝细胞癌 (hepatocarcinoma，HCC)是典型的富血管恶性肿瘤，血管新生化与其生长、浸润、转移、分期及预后有着密切联系。因此，阻断HCC血供的方法有望成为今后 HCC治疗的突破口［3］。蜂毒素 (Melittin，Mel)是从传统中药蜂毒中提取的一种小分子肽类物质。既往研究发现［4-5］，它对多种肿瘤细胞的增殖具有较强的抑制作用，是一个十分具有应用前景的抗肿瘤天然药物。但有关Mel抑制肿瘤细胞合成和分泌促血管生成因子方面的研究鲜有报道。我们观察了Mel对人肝癌细胞株BEL-7402的增殖抑制作用，以及对其分泌促血管生长因子血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 Mel(美国 Sigma公司，批号:104K4016);RPMI 1640培养基(美国Gibco公司);小牛血清 (杭州四季青公司);MTT(美国Sigma公司);兔抗人VEGF多克隆抗体和bFGF多克隆抗体(美国Santa Cruz公司);辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG(美国GenScript公司);SABC免疫组化试剂盒(武汉BOSTER公司);人VEGF和FGF-basic定量ELISA试剂盒(美国R＆D systems公司);经典总RNA提取试剂盒、β-actin、VEGF和 bFGF引物(上海Sangon生物工程公司);Real-time PCR反应试剂盒(德国Roche公司)。

1.1.2 仪器 XDS-1B型倒置相差显微镜(Olympus，日本);Rotor-Gene RG-3000型荧光定量 PCR仪(Corbet Research，澳大利亚);Modle 500型酶联免疫检测仪 (Bio-Rad，美国)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 人肝癌细胞株BEL-7402购自中国科学院上海细胞研究所。……