甲亢性高血压家兔模型中左心房eNOS基因表达和血浆NO水平变化的意义

张 凤，金松南，文今福

(泰山医学院1.动脉粥样硬化研究所、2.药学院药物研究所，山东 泰安 271000)

目前内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)与心血管疾病的关系倍受关注［1－2］。众所周知，左心房是体循环的初级泵，在机体的血液循环中发挥关键性作用，而其功能异常与多种心血管疾病如高血压、房颤、心肌缺血等密切相关。近来研究表明［3］，左心房中eNOS基因表达减弱可诱导房颤的发生和发展。然而，甲亢性高血压病理状态下左心房中eNOS基因表达和血浆NO水平的动态变化尚不清楚。本研究旨在探讨甲亢性高血压病理状态下左心房中eNOS基因表达和血浆NO水平变化，为甲亢性高血压的防治提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物 新西兰大耳白家兔由山东省济宁鲁抗公司提供，体质量2.2～2.5 kg。家兔随机分4组，分别为对照组12 d组，L-甲状腺素(T4)注射12 d组，每组6只。甲亢组皮下注射 T4，其剂量为 0.5 mg·kg－1·d－1，对照组皮下注射等体积的生理盐水。

1.2 试剂 NO试剂盒(南京建成生物工程研究所);TRIzol(Invitrogen公司)，M-MLV逆转录试剂盒(Promega公司)，TaqDNA聚合酶(Solarbio公司)，RT-PCR引物由Invitrogen公司合成。

1.3 血压和心率检测 用1%戊巴比妥钠溶液麻醉家兔，仰卧位固定，颈部正中皮肤做7 cm长纵形切口，行气管插管，用玻璃分针剥开左侧颈动脉鞘，并分离颈总动脉，插入充有肝素的动脉插管，经压力换能器将血压和心率变化输入配有BL-420E系统的电脑进行数据记录和处理。

1.4 RT-PCR法检测左心房eNOS基因表达 利用TRIzol试剂提取总RNA，并进行RNA纯度和浓度检测。cDNA的合成参照逆转录扩增试剂盒操作程序进行。PCR分析:GAPDH作为内参，靶基因为eNOS，引物序列为5'-TACAGACAGCAGGAGGGTTC-3'和5'-TCTCCGTGCTCATGTACCAG-3'。……