喜树嫩叶中喜树碱的HPLC提取方法的选择

李红英，龙 澜，李亚杰，帅超群，程新华，黄建民，张 亮

(1.湖北省农业科学创新中心鄂西综合试验站，湖北 恩施445000;2.恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000)

喜树碱(Camptothecin,CPT)是我国特有树种喜树(CamptothecaacuminateDecne)中所含的一种具有显著抗癌活性的生物碱[1-2]，其抗癌机理是通过抑制拓扑异构酶I发挥细胞毒性[3-4].相关报道已对喜树的嫩叶与成叶中喜树碱含量做了对比实验[5]，研究结果表明嫩叶中喜树碱含量明显高于成叶.而我们已经研究了同一地区不同时间采摘喜树嫩叶的含量差别，得到了湖北建始喜树嫩叶的最高含量为3.25‰.已有的喜树碱含量测定方法中均以甲醇或乙醇浸提数次的方法来提取喜树碱[6-8]，提取时间长，且不易提取完全.本实验以喜树嫩叶为原料，对喜树碱不同提取方法进行比较.

1 试剂、试药和仪器

1.1 试剂与试药

乙腈由(天津市科密欧化学试剂有限公司，色普纯)提供； 水为二次重蒸馏水；甲醇(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)；其余试剂由均为市售分析纯；喜树碱(CPT)对照品(上海源叶科技有限公司)纯度98.5%；喜树嫩叶采集自湖北省恩施州宣恩县.

1.2 仪器

Waters 2695分离单元 Waters2996二极管矩阵检测器;Waters色谱柱恒温箱Empower2数据处理系统，Al204电子天平;KQ-50E型超声波清洗器，SZ-93型自动双重纯水蒸馏器.溶剂过滤器等实验室常规仪器.

2 方法与结果

2.1 含量测定法

2.1.1 色谱条件 Waters Symmetry C18柱(150×3.9 mm，5 μm),流动相：乙腈∶水=35∶65(V/V)，流速1.0 mL/min检测波长254 nm，柱温：25℃，进样量10 μL.

2.1.2 标准溶液的制备 精密称取喜树碱标准品10.0 mg于100 mL容量瓶，以甲醇(色谱纯)为溶剂超声溶解并……