丹参川芎嗪注射液对TNFα干预血管内皮细胞损伤ET-1和ICAM-1基因表达的影响

汪 伟 吕清国 (长春大学，吉林 长春 30022)

1.4 逆转录反应 按Toyobo逆转录试剂盒使用说明进行操作，逆转录反应条件为 37℃变性15 min，95℃ 5 min。产物－20℃保存或立即进行下一步PCR反应。

1.5 实时定量荧光PCR反应 按照Toyobo SYBR实时PCR试剂盒操作说明，加入 4.8 μl ddH2O、10 μl SYBR、0.6 μl上游引物、0.6 μl下游引物和4 μl cDNA。反应条件为：95℃预变性15 s;95℃ 5 s，60℃ 15s，72℃ 20 s 45 个循环。Roche 480 PCR仪上进行定量分析。以正常对照组作为标准，其他组与其进行比较，换算成百分率。

动脉粥样硬化(AS)是一种慢性炎症性疾病，各种危险因素引起细胞释放肿瘤坏死因子(TNF)和白细胞介素等细胞因子作用在内皮细胞上，内皮素(ET)的分泌增加导致内皮细胞功能受损，内皮细胞上的细胞间黏附因子(ICAM)-1表达增加，导致单核细胞黏附在血管内皮细胞上，进一步的促使AS发生和发展。活血化瘀中药具有抗血管内皮损伤、防治AS的作用〔1〕。采用活血化瘀法干预AS的发生发展能够取得良好的效果〔2〕。丹参川芎嗪注射液是根据中医活血化瘀的原理，以丹参和川芎为主的中草药经过现代科学技术方法加工制成，其主要成分为丹参素和川芎嗪。临床广泛应用于闭塞性脑血管疾病，如脑供血不足、脑血栓形成、脑栓塞及其他缺血性心血管疾病，如冠心病的胸闷、心绞痛、心肌梗死、缺血性脑卒中、血栓闭塞性脉管炎等的治疗当中。本文采用炎症因子TNF-α干预致人脐静脉内皮细胞ECV304损伤，模拟AS时血管内皮受损的情况，探讨丹参川芎嗪注射液对与内皮细胞功能密切相关的ET-1和ICAM-1表达的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 丹参川芎嗪注射液由贵州拜特制药有限公司生产。……