铜（III）配合物-罗丹明6G体系流动注射化学发光法测定头孢米诺钠

王娟,陈培云,王婷

（河北大学，河北保定 071000）

铜（III）配合物-罗丹明6G体系流动注射化学发光法测定头孢米诺钠

王娟,陈培云,王婷

（河北大学，河北保定 071000）

在酸性条件下，头孢米诺钠对铜（III）配合物-硫酸-罗丹明6G化学发光体系有强烈的增敏作用，据此建立了流动注射化学发光法定量分析头孢米诺钠方法。头孢米诺钠浓度在2.0×10-7～6.0×10-6g／mL范围内与化学发光强度呈良好的线性关系，相关系数r＝0.999 69，检出限为1.4×10-7g／mL。对2.0×10-7g／mL头孢米诺钠水溶液进行11次平行分析，测定结果的相对标准偏差为1.69%。利用该方法对鸡血样品和头孢米诺钠针剂中头孢米诺钠的含量进行测定，加标回收率为90.2%～102.1%。

头孢米诺钠;化学发光;流动注射

头孢米诺钠（CMNX）商品名为美士灵，其作用性质与第3代头孢菌素相近，主要用于呼吸道感染、泌尿道感染等。目前测定CMNX的方法有高效液相色谱法［1-5］、毛细管电泳法［6］、电化学法［7］等，但这些检测方法复杂、实验周期较长。化学发光法具有仪器简单、所用试剂价格低廉、分析速度快、操作简便等优点，用化学发光法测定CMNX尚未见报道。笔者利用CMNX对Cu（III）和罗丹明6G化学发光的增敏作用，建立了CMNX的流动注射化学发光分析法，并成功应用于针剂和鸡血中CMNX的测定。利用该方法通过测定人体血液及尿液中头孢米诺钠含量，间接地监测观察有机体的健康状况,适合于在医学、药学等行业的普及应用。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

流动注射化学发光分析仪：IFFM-E型，西安瑞迈电子科技有限公司；

双光束紫外-可见分光光度计：TU-1900型，北京普析通用仪器有限公司；

Cu（III）络合物的制备：采用文献［8］报道的氧化铜（Ⅱ）的方法制得，将 NaIO4（5.74 g），CuSO4·5H2O （3.12 g），Na2S2O8（2.00 g），NaOH（18.00 g）与200 mL去离子水混合，加热回流40 min，冷却，得到 Cu（III）络合物，在 0～4℃储存，使用时用水稀至所需浓度;

在Cu（III）络合物水溶液的紫外可见光谱图中，吸收峰在（407±0.4）nm，浓度由在405 nm处的摩尔吸光系数 1.0×104L／（mol·cm）［9］计算。

头孢米诺钠标准溶液：5.00×10-4g／m L，准确称取0.025 g头孢米诺钠对照品，用水溶解后转移至50 mL棕色容量瓶中，用水稀至标线。于4℃冰箱中保存，使用时用水稀至所需浓度;

实验所用试剂均为分析纯；

实验用水为超纯水。

1.2 实验方法

将各输液管插入相应溶液，启动仪器，待管路中溶液流动平稳、基线稳定后，将硫酸和罗丹明6G混合溶液注入到［Cu（HIO6）2］5-及头孢米诺钠样品溶液（标准溶液）载流中，并进入流通池，记录增强化学发光信号强度值，以实现对峰高定量。各管路流速均为3 mL／min；内径为0.8 mm聚四氟乙烯管连接流动系统中各种部件；采样管长为12 cm；阀池距为12 cm；进样量为120 μL时，具有最大的信噪比。

2 结果与讨论

2.1 化学发光动力学曲线

用静态注射法记录了CMNX（5.00×10-5g／mL）-Cu（III）（1.13×10-5mol／L）-H2SO4（0.02 mol／L）-罗丹明6G（8×10-6mol／L）体系的化学发光反应动力学曲线。结果表明，此体系发光是快速发光过程，从开始发光到最大值所用时间约为0.25 s，经过10 s回到基线完成整个发光过程。

2.2 反应条件的选择

（1）反应介质及其浓度的影响

在 Cu（III）络 合 物（1.36×10-4mol／L）和CMNX （5.00×10-7g／mL）浓度不变的条件下，分别对相同浓度的硫酸、磷酸、盐酸、硝酸反应介质进行试验,结果发现在硫酸介质中发光强度最大。考察了硫酸在0.01～0.1 mol／L浓度范围内对化学发光强度的影响。结果表明，硫酸浓度为0.02 mol／L时，体系达到最大发光强度，故选择该浓度为实验最佳浓度。

（2）罗丹明6G浓度对化学发光强度的影响

在 Cu（III）络合物浓度为1.36×10-4mol／L、硫酸0.02 mol／L、头孢米诺钠浓度为5.00×10-7g／mL的条件下，在2×10-6～4×10-5g／mL浓度范围内考察了罗丹明6G浓度对化学发光强度的影响。结果表明当罗丹明6G浓度为8×10-6g／mL时，化学发光强度最大。因此实验选择罗丹明6G的适宜浓度为 8×10-6g／mL。

（3）［Cu（HIO6）2］5-对化学发光强度的影响

以0.02 mol／L硫酸为反应介质，头孢米诺钠和罗丹明6G浓度分别为5.00×10-7g／mL和8.00×10-6g／mL，考察了［Cu（HIO6）2］5-在2.23×10-5～1.81×10-4mol／L 浓度范围内对化学发光信号的影响。结果表明，［Cu（HIO6）2］5-浓度为8.46×10-5mol／L时，发光强度最大。因此选择［Cu（HIO6）2］5-的最佳浓度为 8.46×10-5mol／L。

2.3 校准曲线方程及检出限

在选定的实验条件下，头孢米诺钠在2.0×10-7～6.0×10-6g／mL浓度范围内与化学发光强度呈现良好的线性关系。其回归方程为ΔI=91.368 34+0.346 77c，线性相关系数r＝0.999 69。按照IUPAC建议方法计算检出限为1.4×10-7g／mL。

2.4 干扰试验

在优化实验条件下，对4.0×10-7g／mL的头孢米诺进行了干扰试验。相对误差在±5%以内时，共存物质的允许限度：100倍淀粉、糊精，50倍乳糖、聚乙二醇，25 倍蔗糖、Zn2+、Mg2+、Cu2+，5 倍 D-半乳糖、抗坏血酸，2 倍苯甲酸钠、葡萄糖、Fe2+、Br-，同倍量的柠檬酸、Ni2+、Ba2+、I-均不产生干扰。由于样品中这些物质的实际含量均低于允许量，因此无需分离或掩蔽即可直接测定。

2.5 精密度试验

对浓度为2×10-7g／mL的头孢米诺钠溶液进行11次平行测定，测定结果的相对标准偏差为1.69%。

2.6 样品分析及回收试验

（1）针剂中CMNX的测定

取CMNX针剂一瓶（标示值为0.5 g／瓶），准确称量0.05 g药末后，用水充分溶解并转移至100 mL容量瓶中，用水定容至标线，此储备液存于4℃冰箱中，使用时用水稀释至1 000倍进行测定。同时进行加标回收试验，结果见表1。

以紫外分光光度法作为对照试验：配制不同浓度的CMNX标准溶液（2×10-6，4×10-6，5×10-6g／mL），稀释100倍进行紫外吸收测定，结果见表1。由表1可知，本法测得结果与紫外分光光度法所测结果基本吻合。

（2）鸡血中CMNX含量及回收率测定

购买一只家养健康母鸡，用注射用水溶解3支头孢米诺钠针剂（约含1.5 g头孢米诺钠），在其大腿外部多点肌肉注射。约1.5 h后在翅膀下静脉采血于离心管中，加入3 mL 10%三氯乙酸去除蛋白，放入离心机中以10 000 r／min离心10 min，取上层清液0.2 mL，进一步稀释5 000倍进行测定。样品测定后进行加标回收试验，试验结果见表2。经换算后鸡血样中CMNX含量为2.65×10-3g／mL。

表1 针剂样品中头孢米诺钠的测定及加标回收试验结果

表2 鸡血样中CMNX分析结果及加标回收试验

3 结语

流动注射技术与化学发光相结合，集合了FIA及化学发光的优势，目前已广泛用于食品药品、生物化学、环境质量检测。研究表明，基于头孢米诺钠对酸性铜（III）配合物-罗丹明6G化学发光显著增强，以此建立的测定头孢米诺钠的新方法可应用于对针剂和鸡血样中头孢米诺钠的分析，分析结果可靠。

［1］魏宝康.头孢米诺高效液相色谱法含量测定和杂质检测的研究［J］.海峡药学，2004，16(4):70-71.

［2］陈蓉.HPLC法测定注射用头孢米诺钠的含量及其有关物质［J］.中国药师，2005，9(8):722-723.

［3］朱世谦，倪坤仪，吴振洁,等.关联度分析在反相高效液相色谱同时测定多种头孢菌素的析因试验中的应用［J］.分析化学研究简报，2001，29(4):457-460.

［4］Garcıa-Glez J C，Mendez R，Martın Villacorta J. Quantitative determination of semisynthetic cephamycins in human serum and urine by ion-exchange reversed-phase and ion-pair chromatography［J］. Journal of Chromatography A，1998，812:197-204.

［5］吴振洁，郭伟斌，张启国,等.反相高效液相色谱法同时测定多种头孢菌素的研究（I）［J］.色谱，1999，17(6):518-521.

［6］Sun Hanwen，Wei Lijing，Wu Yuanyuan，et al. Simultaneous determination of aminomethylbenzoic acid，cefminox sodium and etamsylate in human urine by capillary electrophoresis［J］.Journal of Chromatography B，2010，878(21):1 899-1 903.

［7］Abdelilah Hilali，Juan Carlos Jimenez，Manuel Callejon，et al.Electrochemical reduction of cefminox at the mercury electrode and its voltammetric determination in urine［J］. Talanta，2003，59:137-146.

［8］Jaiswal P K，Ysdava K L. Determination of sugars and organic acids with periodato complex of Cu（III）［J］. Indian J Chem，1973(11):837-839.

［9］霍树营.分光光度法研究Ag（III）、Cu（III）配合物氧化有机物的反应动力学及机理［D］.保定:河北大学,2005.

Determination of Cefminox Sodium by Flow–Injection Chemiluminescence Using Cu(III)Complex–rhodamine 6G System

Wang Juan， Chen Peiyun， Wang Ting
（Hebei University， Baoding 071000， China）

Cefminox sodium can enhance the chemiluminescence of copper(III) complex-rhodamine 6G in acidness medium. So a flow injection chemiluminescence method for quantitative analysis of cefminox sodium was established.Cefminox sodium concentration was linear with luminous intensity in the range of 2.0×10-7-6.0×10-6g/mL. The detection limit was 1.4×10-7g/mL with the correlation coefficient of 0.999 69. The relative standard deviation of cefminox sodium determination results was 1.69%(n=11). The method was applied to determine the cefminox sodium in hen flood and injection solution. The recoveries were 90.2%-102.1%.

cefminox sodium; chemiluminescence; flow injection

O657.75＋5

A

1008-6145(2012)01-0049-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2012.01.015

联系人：王娟；E-mail：wjshywjn@126.com

2011-10-27