HPLC-ELSD法测定银杏酮酯软胶囊中萜类内酯的含量

白娟，张洁，李成网

(安徽省医学科学研究院，合肥 230061)

HPLC-ELSD法测定银杏酮酯软胶囊中萜类内酯的含量

白娟，张洁，李成网

(安徽省医学科学研究院，合肥 230061)

建立银杏酮酯软胶囊中萜类内酯含量的测定方法。采用HPLC-ELSD法，色谱条件为Diamonsil C18柱(250mm×4.6 mm，5μm)，正丙醇-四氢呋喃-水（体积比1∶25∶74）为流动相，ELSD漂移管温度107℃，空气流速3.0L/min。银杏内酯 A、银杏内酯 B、银杏内酯 C、白果内酯分别在 4.008 8～20.044 0，3.928 4～19.642 0，3.834 8～19.174 0，3.788 8～30.3104 µg 范围内呈良好的线性关系，线性相关系数分别为 0.999 2，0.999 9，0.999 5，0.999 8，回收率分别为98.48%，97.62%，97.54%，97.24%，测定结果的相对标准偏差分别为 0.99%，1.13%，1.17%，0.83%(n=5)。该方法准确可靠，可用于银杏酮酯软胶囊的质量控制。

高效液相色谱；蒸发光散射检测器；银杏酮酯软胶囊；萜类内酯

银杏酮酯软胶囊是由原料银杏酮酯和聚乙二醇400和甘油等制成的软胶囊剂，主要含有银杏黄酮和萜类内酯等有效成分，能够活血化瘀、增加脑血流量，有效改善脑营养及促进脑代谢等功能。为有效控制该制剂的质量，笔者采用HPLC-ELSD法测定其萜类内酯的含量，该法测定结果准确可靠。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Agilent 1100型，附带化学工作站（chimstation system工作站），美国Agilent公司；

检测器：A lltech2000ELSD型；美国奥泰公司;

电子天平：AD-2 型，0.001 mg，美国 PE 公司；

电子天平：BP210S 型，0.1 mg，德国赛多利斯仪器公司；

银 杏 酮 酯 软 胶 囊（批 号 为 080412，080413，080414）和阴性制剂：芜湖悦盛制药有限公司；

银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C及白果内酯对照品：批号分别为0862-200004，110863-200305，110864-200304，110865-200404，中国药品生物制品检定所；

甲醇：色谱纯；

实验用水：重蒸馏水；

一般微信公众号每周推送3-4次新消息，每次推送2-3条消息，即每个月推送24-48条消息比较容易引起读者的兴趣。根据对288个样本月推送频率进行统计表明，73.9%的调查样本月推送频率不足2条,仅有“SHUTCM麒麟龙舟队”、“张伟毽球工作室”、“摔跤”3个微信公众号月推送频率超过24条。通过对调查样本推送消息的时间特征进行梳理发现，少数民族传统体育微信公众号的存续周期越长，其月推送频率就越低，其根本原因在于目前少数民族传统体育微信公众号由个人运营的比例较高，而由于时间、个人技术储备、收集消息来源渠道等因素的制约，部分个人账号一般只在开通的早期能推送消息。

实验所用其它试剂均为分析纯。

1.2 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱 (250mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：正丙醇-四氢呋喃-水（体积比1∶25∶74）；柱温：30℃；漂移管温度：107℃；空气流速：3.0L/m in ；进样量：10μL。

1.3 对照品溶液及供试品溶液制备

(1)对照品溶液

精密称取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C对照品适量，分别加入甲醇制成浓度为2，1，1，1 mg/m L 的溶液。

(2)供试品溶液

取银杏酮酯软胶囊内容物适量，精密称定，加水10m L，加入2%的盐酸2滴，用乙酸乙酯振摇提取 4 次（用水量分别为 15，10，10，10m L），合并提取液，用20m L 5%乙酸钠溶液洗涤。分取乙酸钠溶液，用10m L乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20m L，分取水洗液，用乙酸乙酯10m L洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣用丙酮溶解并转移至5 m L的量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，用 0.45 µm 滤膜过滤，即得。

(3)阴性对照品溶液

2 结果与讨论

2.1 专属性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪进行测定，色谱图分别见图1-3。由图1-3可知，各内酯成分可基线分离，银杏内酯C、白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B各色谱峰之间分离度大于1.5，阴性对照无干扰，方法专属性良好。

图1 对照品高效液相色谱图

图2 供试品高效液相色谱图

图3 阴性对照干扰高效液相色谱图

2.2 流动相及其配比

通过对甲醇-四氢呋喃-水、甲醇-水、正丙醇-四氢呋喃-水等多种流动相进行梯度洗脱比较试验，发现正丙醇-四氢呋喃-水（体积1∶25∶4）溶液的系统分离效果最好，且柱效高。

2.3 检测器漂移管温度及空气流速

ELSD两个关键的参数为检测器的飘移管温度和空气流速，对飘移管温度进行了选择。在空气流速固定的条件下，温度从95～125℃，每隔3℃进样1次，观察信噪比。结果表明，在飘移管温度107℃，空气流速3.0L/m in的条件下，有较低的信噪比和较高的信号响应值。

2.4 萃取次数

制备供试品溶液用乙酸乙酯萃取萜类内酯时，为保证充分提取总萜类内酯成分，对萃效果进行了5次考察，前3次萃取液中均含有萜类内酯，后两次萃取液均未检出萜类内酯成分，为保证萜类内酯成分提取完全，确定萃取次数为4次。

2.5 线性方程

分别精密吸取银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯 C 对照品溶液 4，8，12，16，20µL ；白果内酯对照品溶液 2，4，8，12，16 µL。注入液相色谱仪，测定峰面积，分别以进样量的自然对数(x)为横坐标，峰面积的自然对数(y)为纵坐标，进行线性回归。各成分线性回归方程、相关系数、线性范围见表1。

表1 回归方程、线性范围、相关系数

2.6 精密度试验

精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪测定，重复6次。银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯色谱峰面积测定结果的相对标准偏差分别为 1.37%，1.52%，1.49%，1.33%，表明该法精密度良好。

2.7 重现性试验

取同一批号的样品5份，分别按供试品溶液配制方法制备样品溶液，进样测定，用外标两点法对数方程分别计算银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯含量。银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯含量测定结果的相对标准偏差分别为1.56%，1.21%，1.89%，0.96%，表明该法重现性良好。

2.8 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液6份，分别于0，2，4，6，8，10h进样分析。银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯峰面积测定结果的相对标准偏差分别为 1.44%，1.27%，1.73%，1.76%，表明供试品溶液在10h内萜类内酯含量无明显变化，稳定性良好。

2.9 回收试验

精密称取已知内酯含量的样品5份，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，分别精密加入适量的的银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯对照品溶液，进样分析，结果见表2。

2.10 样品测定

取3批银杏酮酯软胶囊（批号分别为080412，080413，080414），按 1.3 方法制备样品溶液，在 1.2色谱条件下进行测定，结果见表3。样品中的其它物质对萜类内酯的测定无干扰。

表3 样品测定结果（n=3）

3 结语

银杏酮酯中萜类内酯无C＝C双键和共轭结构，无法采用紫外检测器进行检测，本实验采用HPLCELSD法，在选定的色谱条件下，测定银杏酮酯软胶囊中银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯的含量，分离良好且阴性对照溶液无干扰。该法重现性好、准确可靠，可用于银杏酮酯软胶囊的质量控制。

表2 回收试验结果

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社,2010:296.

［2］刘艳,王艳,张玉萍.HPLC－ELSD法测定银杏酮酯胶囊中萜类内酯的含量［J］.安徽中医学院学报，2009，28(6):63-65.

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［4］郭洪,罗瑛,余国华,等.银杏磷脂胶囊的制备与质量控制［J］.中国医院药学杂志，2008，28(7):574-575.

［5］李钦,马凤仙,程铁峰.HPLC－ELSD法测定银杏酮酯滴丸中萜类内酯的含量［J］.中成药，2007，29(6):836-839.

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Determ ination of Terpene Lactones in Yinxingtongzhi Soft Capsule by HPLC–ELSD M ethod

Bai Juan，Zhang Jie，Li Chengwang
（Anhui Academy of Medical Sciences，Hefei 230061，China）

A method for the determ ination of terpene lactones in Yinxingtongzhi soft capsules was established.HPLC-ELSD method was used in the quantitative analysis by using a Diamonsil C18(250mm×4.6 mm，5μm)column. The mobile phase was n-propanol-tetrahydrofuran-water(volume ratio was 1∶25∶74)，ELSD evaporator tube temperature was 107℃，and air fl ow rate was 3.0L/min. The calibration curve had good linear relationship in the range of 4.008 8-20.044 0, 3.928 4-19.642 0, 3.834 8-19.174 0, 3.788 8-30.3104 µg for ginkgolide A，ginkgolide B，ginkgolide C and bilobalide, respectively (r=0.999 2，0.999 9，0.999 5，0.999 8). The recoveries were 98.48%，97.62%，97.54%，97.24%，and RSD were 0.99%，1.13%，1.17%，0.83%(n=5), respectively. This method was accurate and reliable，it can be used for the quality control of Yinxingtongzhi soft capsules.

HPLC; ELSD; Yinxingtongzhi soft capsule; terpene lactone

065707+2

A

1008-6145(2012)01-0064-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2012.01.020

联系人：白娟；E-mail:baijuan8605@163.com

2011-11-23