原代培养小鼠睾丸间质细胞的甘草毒性研究

孙新明，杨亚军

(井冈山大学医学院，江西吉安343000)

不孕不育症是全球性复杂的医学和社会学问题之一。随着工业的日益发达及对环境污染控制的相对不足和临床药物滥用，男性因素所引发的不育不孕症发生率越来越高而逐渐引起人们的重视［1-3］;长期以来，甘草等植物中草药及其复方常作为中药材食品添加物及临床常用药得以广泛应用。但近代药理研究发现，不少临床常用的中药如甘草、补骨脂等可促进雌性动物乳腺发育和子宫明显增质量及血清雌激素水平升高［4］，但其雌激素样作用是否与环境雌激素一样具有男性生殖毒性作用?特别是甘草对男性生殖系统的毒性作用目前尚未见细胞毒性研究。鉴于此，本研究从甘草对雄性小鼠睾丸间质细胞体外培养及其分泌睾酮的影响入手研究甘草对睾丸的生殖毒性，为甘草等具有雌激素样作用中药材的临床应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物和材料清洁级BABL/c雄鼠10只(购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司);市售药用甘草采用超声提取法和树脂吸附技术自制成浸膏(含甘草提取物62.5 mg/mL)后用PBS溶液配制成10 mg/mL药物浓度，过滤除菌，置冰箱冷藏备用;

1.2 主要试剂DMEM、DMEM/F12、小牛血清、苔盼蓝购于GIBCO公司;胶原酶、透明质酸酶、perooll分离液、Hepes购于SIGMA公司;胰蛋白酶购于AMRESCO公司;HE染色液、PBS、D-hanks液培养基均为自制试剂;其他常规普通试剂均为国产分析纯。

1.3 甘草对睾丸间质细胞的体外毒性实验

1.3.1 小鼠睾丸间质细胞的分离与培养取4～5周龄22～25 g的BABL/c雄鼠10只，按照邵冰玉等报道的方法［5］分离得到睾丸间质细胞悬液。……