建立NF-κB核转位的转基因细胞模型

苑玉和，吴苗苗，刘 岩，胡金凤，王宏旭，陈乃宏

(天然药物活性物质与功能国家重点实验室，中国医学科学院药物研究所，北京协和医学院药物研究所，北京 100052)

核转录因子-kappa B(nuclear factor-kappa B，NF-κB)是一种广泛表达并发挥重要作用的转录因子，具有调控细胞存活、增殖、分化等功能。因在最初发现的时候能与免疫球蛋白的轻链(κ链)增强子结合并具有转录激活活性而命名。因其能够参与多种基因的转录调控，与炎症反应、免疫应答，以及细胞的增殖、转化和凋亡等重要的生理病理过程密切相关。目前对于NF-κB活性的检测多通过免疫印迹、免疫荧光或报告基因的方法，但上述检测方法中由于样品的准备过程比较繁琐，而且样品不易保存，更重要的是不能够观察活细胞的状态，因此建立一种能够快速、简易观察NF-κB活性的方法对于NF-κB相关通路的研究具有重要的意义。本文将通过构建NF-κB中的p65与绿色荧光蛋白的融合载体，转染不同的细胞后，建立显微镜下直接观察NF-κB核转位的细胞模型，对相关化合物的筛选与机制研究具有重要意义。

1 材料

BV-2(小胶质细胞)、PC12(大鼠嗜铬细胞瘤)购自中国医学科学院基础所细胞中心，菌株E.coli DH5α为本室保存;真核表达质粒pEGFP-C1来自Clontech公司。TRIzol购自Amresco，TANScript M-MLV逆转录酶购自天根公司，Taq酶、dNTPs、核酸内切酶XhoI、EcoRI和T4 DNA连接酶购自大连宝生物有限公司和Biolab公司，RNase A、Hochest33342购自Sigma公司，DNA MarkerⅡ购自鼎国生物有限公司。核酸纯化试剂盒、质粒大提试剂盒购自威格拉斯生物有限公司。所有细胞培养基购自Gibco公司，胎牛血清购自Hyclone公司，实验耗材购自Corning公司。……