PCR 法快速检测耐热霉菌雪白丝衣霉

张 慧 郑晓冬 姜 侃 汪 新 陈小珍

（1.浙江省质量检测科学研究院食品检测部，浙江 杭州 310013；2.浙江大学生物系统工程与食品科学学院，浙江 杭州 310058）

耐热性霉菌是引起果蔬汁饮料腐败的重要原因之一［1－3］。它可产生子囊孢子，能够耐受巴氏杀菌或UHT 杀菌而存活下来，并能在缺氧的环境中生长，抗热能力比其它霉菌强很多。受耐热霉菌污染的果汁，在贮存期间易发生变色、分层、胖听等，甚至产生丝衣霉毒素A、棒曲霉素等有毒的次生代谢产物［4－6］，给食品安全带来隐患，也给企业带来经济损失。一些企业尤其是出口型企业，为满足国际需求，通常要求产品中耐热霉菌不得检出。目前耐热霉菌的检测通常采用PDA 平板培养法，但检测时间较长［1］，影响了果蔬汁产品的快速流通。为保障国内外消费者的健康安全，急需寻找一种能够快速检测鉴别果汁中耐热霉菌的方法。

雪白丝衣霉菌是果汁中易污染的耐热霉菌之一［7－9］，本试验根据雪白丝衣霉菌的beta－tubulin 基因序列，通过设计引物、条件优化等建立PCR 快速检测方法，力图快速、准确检测果汁中雪白丝衣霉菌污染，为产品质量控制提供技术基础。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 菌株

本试验所用菌株见表1。

1.1.2 主要仪器

电子天平：AB104－N，上海第二天平仪器厂；

梯度PCR 仪：Veriti 96孔，美国应用生物系统公司；

电泳仪：Bio－Rad PowerPace Basic，美国伯乐公司；

自动凝胶成像系统：Bio－Rad Gel Doc XR，美国伯乐公司；

高速离心机：Microfuge 16，贝克曼库尔特商贸有限公司。

1.1.3 主要试剂

Biospin真菌基因组DNA 提取试剂盒：杭州博日科技有限公司；……