高效液相色谱法测定心可舒片中丹参素钠和原儿茶醛含量

2012-04-08 11:52仇雅静陈骁鹏
中国药业 2012年19期
关键词:素钠丹参批号

屈 蓉,仇雅静,陈骁鹏,叶 慧

(江苏省泰州市食品药品检验所,江苏 泰州 225300)

心可舒片为2011年江苏省评价性抽样品种之一,收载于2010年版《中国药典(一部)》[1],由丹参、葛根、三七、山楂、木香5味药组方。丹参具有活血化瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈的功效,为心可舒片的主药之一。生产工艺中,丹参为加水煎煮两次,合并煎液,滤过,滤液浓缩使用。丹参素钠和原儿茶醛为丹参的主要水溶性成分[2],这两者的测定方法主要有分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、电化学法、毛细管电色谱法和微流控芯片法[3]。标准中仅对原儿茶醛进行了薄层鉴别,未对其含量进行质量控制。考虑到基层检验检测单位仪器的普及性,采用高效液相色谱法对丹参中的水溶性成分丹参素钠、原儿茶醛进行含量测定,为全面控制心可舒片的质量提供了可靠依据,现报道如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(Waters2695/2996/Empower色谱系统)。丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品(供含量测定用,中国药品生物制品检定所,批号分别为110855-200809和110810-200506);心可舒片(山东沃华医药科技股份有限公司);甲醇为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Waters Symmetry C18柱(150mm×3.9mm,3.5μm);流动相:甲醇-0.5%醋酸溶液(10∶90);检测波长:280 nm;流速:1.0mL/min;柱温:35℃;进样量:10μL。

2.2 溶液制备

精密称取丹参素钠对照品25.03 mg,置50 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并定容至刻度,作为对照品贮备液A。精密称取原儿茶醛对照品10.56mg,置100mL量瓶中,加50%甲醇溶解并定容至刻度,作为对照品贮备液B。取样品约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇25mL,密塞,称定质量,超声处理30min,放冷,再称定质量,用50%甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,即得供试品溶液。取除丹参外的处方药材,参照制剂生产工艺制备阴性样品,按照供试品溶液制备方法制备,即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验:分别吸取线性关系考察项下的对照品混合液、上述供试品溶液和阴性对照品溶液各10μL,注入液相色谱仪,结果见图1。供试品溶液中丹参素钠、原儿茶醛达到基线分离,阴性对照品溶液无干扰,基线稳定,方法可行。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:取对照品贮备液A,分别精密吸取2,4,6,8,10mL,置20mL量瓶中;另取对照品贮备液B,分别精密吸取1,3,5,7,9mL,置上述相应的20mL量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,制成对照品混合液。分别进样10μL,在上述色谱条件下,测得峰面积。以峰面积 Y为纵坐标、对照品质量浓度 X(μg/mL)为横坐标绘制标准曲线。得丹参素钠回归方程为 Y=5 076.8 X+ 17 337,r=0.999 1(n=5),线性范围为50.06~250.30μg/mL;原儿茶醛回归方程为 Y=39 492X-17 395,r=0.999 5(n=5),线性范围为5.28~47.52μg/mL。

检测限确定:分别取质量浓度为100.12μg/mL的丹参素钠和15.84μg/mL的原儿茶醛对照品溶液,稀释至适当质量浓度,按信噪比3∶1计算检测限。本色谱条件下,丹参素钠检测限为9.34μg/mL,原儿茶醛检测限为1.76μg/mL。

精密度试验:精密吸取线性关系考察项下第2个质量浓度的标准曲线对照品溶液10μL,重复进样5次,在拟订的色谱条件下进行测定。结果丹参素钠的 RSD为0.7%(n=5),原儿茶醛的RSD为0.5%(n=5)。

重复性试验:精密称取批号为110449的样品5份,依法制备供试品溶液,进样测定。结果丹参素钠的 RSD为1.1%(n=5),原儿茶醛的RSD为1.3%(n=5)。

稳定性试验:精密吸取批号为110449的供试品溶液10μL,按上述色谱条件,分别于0,2,4,8,12,24 h时各进样1次,进行测定。结果丹参素钠的 RSD为1.0%,原儿茶醛的 RSD为1.2% (n=6),表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验:取批号为110449的样品5份,每份约0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入对照品贮备液A 3mL、对照品贮备液B 2mL,按供试品溶液制备方法制备,在上述色谱条件下,进行测定,计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=5)

2.4 样品含量测定

精密称取不同批号的15批样品,按供试品溶液制备方法制备,在上述色谱条件下,进行含量测定。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(mg/片)

3 讨论

将丹参素钠和原儿茶醛对照品溶液分别在200~400 nm波长范围内进行紫外吸收扫描,丹参素钠在282 nm波长处有最大吸收,原儿茶醛在278 nm波长处有最大吸收。综合考虑,选用280 nm作为检测波长。

试验中用甲醇和50%甲醇作为溶剂并进行比较,结果显示,前者结果明显优于后者,故选用50%甲醇作为溶剂。选用25mL和50mL 50%甲醇作溶剂进行考察,所测结果无明显差异,从环保节约的角度出发,选用25 mL作为提取量。考察了20,30,45 min 3个时间点,结果显示,超声提取30min所测结果高于提取20min,且与45min无明显差异,故选择超声处理30min。

对15个批号的样品中丹参素钠和原儿茶醛含量之和进行标准差计算,得 RSD为36.5%,说明各个批号的差异性较大,说明有必要增加此项目对产品进行质量控制。今后还可进一步开展心可舒片中丹参指纹图谱的研究工作。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:604-605.

[2]张文生,叶正良,岳洪水,等.丹参药材指纹图谱研究[J].中药材,2001,24(7):478-480.

[3]吴小林,钟晓维,李偶连,等.微流控芯片对丹参滴注液中丹参素和原儿茶醛的测定[J].分析测试学报,2008,27(8):885-887.

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