高效液相色谱－蒸发光散射检测器法测定甘桔冰梅片中桔梗皂苷D含量

彭善贵，文永盛

(四川省成都市食品药品检测中心，四川 成都 610045)

甘桔冰梅片是由桔梗、甘草、冰片、薄荷等8味中药加工制成的片剂，现执行标准为WS－10871(ZD－0871)－2002。桔梗为方中君药，用量较大，其宣肺利咽、祛痰排脓[1]的作用与成药功效密切相关，桔梗含量高低直接影响药品质量。桔梗含多种皂苷，以桔梗皂苷D为主[2]。笔者参照2010年版《中国药典(一部)》桔梗含量测定项，用高效液相色谱－蒸发光散射检测器(HPLC－ELSD)法测定甘桔冰梅片中桔梗皂苷D，方法准确、可靠、操作简便。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695型高效液相色谱仪；Waters 2424型蒸发光散射检测器；UV－2501PC型紫外分光光度计(日本岛津)；AE－240型电子天平；SK250H型超声仪(上海科导超声仪器有限公司)。甘桔冰梅片(重庆华森制药有限公司，批号为100901)；桔梗皂苷D对照品(成都曼思特生物科技有限公司，纯度标示为99.8%)；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂试药均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈－水(26∶74)；流速：1.0mL/min；漂移管温度：85℃，气体流速2.9 SLPM/min。理论板数按桔梗皂苷D峰计算不低于4 000。在此条件下，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

精密称取桔梗皂苷D对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.5mg的溶液，即得对照品溶液。取本品30片，去包衣，称重，研细，取约15片重，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定质量，超声处理(功率为250W，频率为40 kHz) 40min，放冷，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，水浴蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30，30，25，20 mL)，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30mL，弃去氨试液，蒸干正丁醇液，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

图1 HPLC－ELSD图谱

2.3 方法学考察

阴性干扰试验：去除处方中的桔梗，制备阴性样品。按上述供试品溶液制法制成缺桔梗的阴性对照品溶液。将对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液在同一条件下测定，结果表明，方法专属性良好，见图1。

线性关系考察：精密称取桔梗皂苷D对照品4.76 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述对照品溶液各2，5，10，15，20，25μL注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积的常用对数为纵坐标(Y)、进样量为横坐标(X)，得回归方程 Y=1.368X+5.262 5，r=0.999 2(n=6)。结果表明，桔梗皂苷D进样量在0.952～11.900μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取0.476g/L的对照品溶液10μL，重复进样5次，测定桔梗皂苷D峰面积。结果的 RSD=1.28%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，12，24 h时进样，测定桔梗皂苷D峰面积。结果的RSD=1.26% (n=6)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

重复性试验：取样品5份，按供试品溶液制备方法制备并测定含量。结果平均含量为0.662 mg/g，RSD=0.74%(n=5)，表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密称取已知含量的样品(批号为100901，桔梗皂苷D含量为0.662mg/g)6份，约2.5g，置锥形瓶中，分别精密加入1.802g/L桔梗皂苷D对照品溶液1mL，依法测定。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批样品(批号分别为100901，100801，100601)，测定含量。结果平均含量为0.66mg/g。

3 讨论

曾对蒸发光散射检测器测定条件(漂移管温度、载气流量、最低检测限)进行了考察，结果漂移管温度为85℃，气体流速为2.9 SLPM/min时最佳。如果试验中漂移管温度和气体流速不稳定，高效液相色谱图会漂移，影响桔梗皂苷D的出峰时间及峰面积。

表1 加样回收试验结果(n=6)

在选择提取溶剂时，曾对甲醇、乙醇、50%甲醇进行了比较，结果50%甲醇提取的效率较高、样品溶液颜色深浅适中、色谱图背景无干扰，处理方法简便、可行。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：259－260.

[2]夏 泉，董婷霞，詹华强，等.HPLC－ELSD法测定不同来源桔梗中桔梗皂苷E的含量 [J].药物分析杂志，2006，26(5)：637－639.