产壳聚糖酶菌株的单因素及复合条件诱变育种*

王艳君，廖春林

(福建师范大学福清分校生化系，福建福清350300)

壳聚糖酶(Chitosanase，EC3.2.1.99)是水解壳聚糖制备壳寡糖的专一性水解酶之一，是一种不同于几丁质酶的新酶，是能够水解完全脱乙酰化的壳聚糖。国内外大量研究表明，壳聚糖酶可以提高植物抗性、防治病虫害、提高农作物产量等。另外，其水解产物壳寡糖(Chitooligosaccharides，简称COSs)则具有独特的生理活性和功能，可提高机体免疫力、抑制肿瘤细胞生长、在人体肠道内可活化增殖双歧杆菌、降低血压等，同时壳寡糖还具有抗菌防腐、保水保湿等性能，其在医药、食品、化妆品等工业中具有广阔的应用前景［1－2］。

目前壳聚糖酶已商品化，但由于原始出发菌株产壳聚糖酶能力仍较低，使得壳聚糖酶的生产成本偏高，限制了壳聚糖酶的实际应用。因此，筛选高产壳聚糖酶的菌株以及通过诱变等方式提高壳聚糖酶产量的研究具有重要的理论和实际意义。已报道的产壳聚糖酶的微生物主要有:肠杆菌(Enterobacter sp.)［3］、链霉菌(Streptomyces spp.)［4］、芽孢杆菌(Bacillus sp.)［5］、假单胞菌(Psuedomanas sp.)［6］、拟无枝杆菌(Amycolatopsis sp.)［7］、粘细菌(Myxobacter sp.)［8］、金杆菌(Aureobacterium sp.)［9］、诺卡氏菌(Nocardia orientalis)［10］、木 霉 (Trichoderma.reesei)［11］、青 霉 (Penicillum islandicum)［12］、毛 霉 (Mucor rouxii)［13］、曲霉(Aspergillus fumigatus)［14］、镰孢菌(Fusarium solani)［15］、白僵菌(Beauveria bassiana)［16］、红酵母(Rhodotorula gracilis)［17］等。本研究以土壤中分离筛选得到的一株产壳聚糖酶的青霉菌M2为出发菌株，结合物理及化学复合诱变方法，探讨不同的诱变方法对提高该菌株产壳聚糖酶活力的影响。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

青霉菌M2由本实验室从福建沿海潮间带泥样中筛选得到，作为碳源的水溶性壳聚糖购自浙江金壳有限公司。其他试剂均为国产分析纯。……